如何进行心肌细胞收缩力测定-SmartHeart:在单次测定中实现突破性的读数数量

如何进行心肌细胞收缩力测定-SmartHeart:在单次测定中实现突破性的读数数量

培养您的细胞-让它们跳动-测量

SmartHeart 平台是获取基于收缩力的读数和光学映射的最简单心脏类器官

SmartHeart 是一种3D 心脏检测工具,它能够在一个平台上实现基于源自 hiPSC 和人类成纤维细胞的心肌细胞的功能性心脏类器官的自组装和成熟,以及相关读数的获取。

水凝胶具有光学透明性,能够对组织进行高分辨率成像,并通过光学映射观察离子交换。

水凝胶形状提供了一种微环境,使细胞能够在数小时内沉淀并聚集成一个跳动的环。它可以用来测试新化合物或评估针对其他类型病理的药物的毒性,因为它可以简单地缩放以适应 HTS 和 HCS 要求。

> 即用型

将细胞直接接种在微结构板上

> 圆环形 3D 形态模拟心脏生理学

特定圆环形状可促进组织成熟,同时实现广泛的测试

> 单次测定中可读取多个关键数据

量化收缩应力和应变、搏动频率和搏动幅度、收缩速度和离子交换、观察组织形态和细胞内组织等。

> 可预测位置且易于成像

组织位于可预测的位置,从而实现自动图像采集(明场、荧光、相衬等)

> 可调节基底刚度

控制基质硬度,模拟您细胞类型的体内环境(5 kPa 至 20 kPa)

圆形 3D 形态 有望成为更好的心脏生理模型

巴黎心血管研究中心(巴黎蓬皮杜欧洲医院)心力衰竭转化研究实验室 Jean Sébastien HULOT 教授团队提供,请参阅相关出版物: A versatile high-throughput assay based on 3D ring-shaped cardiac tissues generated from human induced pluripotent stem cell derived cardiomyocytes

高分辨率成像、 组织形态和细胞内成像

14 天后对组织进行免疫荧光成像。使用共聚焦显微镜进行 Z 扫描。通过在 iPSC-CM 下方形成结构层,添加成纤维细胞来为组织提供稳定性。

数据来自Seguret 等人。eLife 12:RP87739(2023)。

技术的工作原理和特点:

由于水凝胶的机械性能是已知的,并且可以进行调整以匹配细胞模型,因此可以通过中心柱的变形来评估基于收缩性的参数。

负责环状类器官形成的结构化水凝胶的工作原理图。

>细胞培养基质基于生物相容性的聚乙二醇 (PEG) 水凝胶,其模制微孔包含中心柱。

>水凝胶具有细胞排斥性,可防止细胞粘附到基质上。

>微孔的倾斜壁(漏斗形)允许细胞被引导至圆形腔,从而减少接种过程中丢失的细胞数量。

>环形类器官在培养基交换、添加药物等过程中保持原位。这是因为微孔底部由玻璃制成,使类器官能够固定在该区域。此外,中心支柱具有“s”形轮廓,可防止环因收缩而向上滑动。

>水凝胶的柔软性质(5 kPa 至 20 kPa)使得能够通过中心柱的变形来量化收缩力。

>可以根据现有的细胞模型调整凝胶硬度。

>细胞培养基质与图像采集兼容,因为细胞接种在仅由玻璃组成的区域,细胞周围的 PEG 水凝胶是透明的,并且使用 #1.5 玻璃(适合大多数物镜)。

>所用细胞是来自 hiPSC 和成纤维细胞的心肌细胞。

智能[收缩]技术方案:

使用高分辨率铣削制造的模具,在生物相容性水凝胶(聚乙二醇-PEG)上塑造用于细胞培养的环形腔。

分析软件:

可使用公司开发的软件对基于收缩性的读数进行评估。

可以使用普通明视野显微镜记录收缩环状组织的视频。帧速率应至少为 30 fps,分辨率应高于 500 x 500 像素。

通过对此类视频的分析,软件确定了以下参数:

>跳动频率

>收缩幅度

>收缩应变

>收缩速度

>收缩应力

组织的组装和成熟

数据来自Seguret 等人。eLife 12:RP87739(2023)。

药物测试示例

数据来自Seguret 等人。eLife 12:RP87739(2023)。

应用

药物研发

> 肌肉萎缩

> 新陈代谢

疾病模型

> 肌肉疾病

> 神经肌肉疾病

> 代谢紊乱

>肌肉纤维化

心脏毒性研究

世联博研北京公司提供,问题可咨询:010-67529703,13060393900。

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