在细胞培养过程中，有时虽未检测到传统意义上的污染，但背景中却出现小黑点，这一现象通常由以下几方面原因导致：
1. 细胞代谢产物- 细胞碎片与凋亡小体：细胞在生长代谢过程中，会不断产生一些代谢废物和自身更新换代的产物。当细胞进入凋亡程序时，会形成凋亡小体 ，这些凋亡小体和细胞代谢产生的碎片在显微镜下观察时，可能呈现为小黑点。例如，在细胞培养条件不适宜，如营养缺乏、培养时间过长时，细胞凋亡的比例会增加，凋亡小体的产生也相应增多，导致背景小黑点明显。
- 分泌性颗粒：某些细胞具有分泌功能，会向细胞外环境释放分泌性颗粒。这些颗粒可能包含蛋白质、酶或其他生物分子，在显微镜下观察时也可能表现为小黑点。比如胰岛细胞会分泌胰岛素等颗粒，当这些细胞在培养过程中分泌活动较为旺盛时，背景中就可能出现因分泌颗粒而产生的小黑点。
图片来自网络
- 蛋白沉淀：培养基中的蛋白质成分在一些情况下会发生沉淀。例如，当培养基储存条件不当，如温度过高或过低，可能导致蛋白质变性、聚集并沉淀，形成小黑点。另外，不同批次的血清质量存在差异，若血清中某些蛋白质含量不稳定，也可能在培养基中析出形成小黑点。在使用含血清的培养基时，血清中的纤维蛋白原有时会在培养过程中析出，表现为小黑点。
- 结晶现象：培养基中的一些盐类、氨基酸或其他小分子物质，在特定条件下可能会结晶析出。比如，当培养基 pH 值发生较大变化，或者在培养基浓缩、水分蒸发的情况下，这些物质的溶解度改变，就容易结晶形成小黑点。此外，在低温环境下储存培养基，某些成分也可能结晶析出。
- 器材残留杂质：培养过程中使用的器材，如培养瓶、移液器吸头、离心管等，若清洗不彻底，可能残留杂质。这些杂质可能是生产器材过程中的残留物，或者是上次使用后未洗净的物质，在显微镜下观察细胞时，就会呈现为小黑点。例如，培养瓶若没有经过严格的酸碱浸泡、冲洗和高压灭菌处理，瓶壁上可能残留一些化学物质或微小颗粒，进入培养基后形成小黑点。
- 操作引入杂质：在细胞培养操作过程中，如果没有严格遵守无菌操作规范，周围环境中的灰尘、杂质等可能混入培养基。例如，在超净台外打开培养瓶，或者在操作时手臂、衣物等物品距离操作区域过近，都有可能使杂质掉入培养基中，在显微镜下显示为小黑点。此外，在添加试剂时，如果试剂瓶瓶口不干净，也可能带入杂质。
图片来自网络
- 外泌体等囊泡释放：细胞会向细胞外环境释放多种类型的细胞外囊泡，其中外泌体是一种常见的细胞外囊泡。外泌体直径通常在 30 - 150nm 之间，在普通光学显微镜下难以分辨其具体结构，可能被观察为小黑点。细胞在受到刺激或处于特定生理状态时，外泌体的释放量会增加。例如，当细胞受到炎症因子刺激时，会通过释放外泌体来传递信号，此时背景中的小黑点可能会增多。
