探针配制：
储备液：DMSO溶解（典型浓度1–10 mM），分装避光保存。
工作浓度：0.5–25 μM（依细胞类型和实验时长调整）。
染色流程优化：
孵育时间：通常15–45分钟（避免过长致假阳性）。
洗涤步骤：PBS清洗去除未进入探针，减少背景信号。
信号干扰控制：
避光操作：全程避光延缓荧光淬灭。
死细胞排除：可联用PI（碘化丙啶）等死细胞染料
试剂信息
英文名称：5(6)-Carboxy-2'',7''-dichlorofluorescein Diacetate
简称：5-(6)-CDCFDA
中文名称：5[6]-羧基-2',7'-二氯荧光素二乙酸酯
CAS NO：127770-45-0
分子式：C25H14Cl2O9
分子量：529.28 g/mol
状态：白色固体
激发波长：504nm
发射波长：529nm
溶解性： 溶于DMSO
纯度：≥95%
储存条件：-20℃避光干燥
&作用机制5-(6)-CDCFDA的作用依赖于细胞代谢活性和膜完整性，具体机制分三步：
1. 细胞渗透与酯酶水解
穿透细胞膜：探针以非极性形式自由扩散进入活细胞（死细胞因膜破损无法积累）。
酶促活化：胞内非特异性酯酶水解乙酰基，生成带负电荷的荧光产物 5-(6)-carboxy-2',7'-dichlorofluorescein（羧基二氯荧光素）。
关键点：水解过程依赖酯酶活性，直接反映细胞代谢状态。
2. 荧光滞留与信号检测
水解产物因羧基带负电，无法穿透完整细胞膜，仅在活细胞内积累（死细胞荧光泄漏）。
荧光强度与活细胞数量/活力正相关，可通过流式细胞术或荧光显微镜🔬定量。
3. 多功能扩展应用
活性氧（ROS）检测：二氯取代基增强抗氧化性，荧光强度变化可间接反映ROS水平。
pH传感：pKa ≈ 4.8，在酸性环境中荧光增强，适用于细胞器pH监测。
生物学意义：该探针同步评估细胞活力双指标——酶活性（代谢功能）和膜完整性（结构完整），优于单一参数检测方法（如台盼蓝）。
&试剂关键词CDCFDA；5(6)-CFDA；Fluorescein diacetate (FDA) 二乙酸荧光素；Calcein AM钙黄绿素； Bacterial activity 细菌活性检测； CAS NO：127770-45-0；
&相关试剂CalceinRed,AM钙黄绿素红(红色)
SYTOX Green Nucleic Acid Stain
YOYO 3 Far-red Fluorescent Dye
YOYO 1 Green Fluorescent Dye
Lucifer Yellow CH dipotassium salt
Mag-520 Potassium Salt 镁离子荧光探针
Rhod-2,AM,Cell Permeant 钙离子荧光探针
Fluo-4 Pentapotassium Salt Fluo-4五钾盐
BMPO(Spin trapping reagent) 自旋捕获剂
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本试剂用于科研领域，其他用途概不适用！
