CF 680 Tomato lectin:结构特征和常见问题注意事项

CF 680 Tomato lectin:结构特征和常见问题注意事项
一、物化性质

保存条件:避光、-20°C储存,避免反复冻融

溶解性:溶于水及多数有机溶剂

英文名称:CF 680 Tomato lectin

中文名称:CF 680标记的番茄凝集素

分子量:71 kDa

激发/发射波长:~670 nm / ~690 nm

规格:5mg、10mg、25mg

纯度:95%+

二、结构特征

1. 番茄凝集素分子结构

根据 X-ray 晶体学与 cDNA 克隆分析:

模块组成:

包含 两个同源几丁质结合模块 ,由短脯氨酸富集连接区分隔 。

每个 CBM 含 两个串联的 hevein 结构域,通过四肽连接子连接。

末端结构域:

N 末端:伸展蛋白样结构域。

C 末端:谷氨酰胺富集结构域。

空间构型:

脯氨酸富集区的中心位置影响蛋白构象灵活性,导致电泳和离心中的异常迁移 。

以 三价形式存在(含至少三个功能性 hevein 结构域),而非传统认为的四聚体。

2. CF680 偶联位点

染料通过氨基反应基团(如 NHS ester)与凝集素表面赖氨酸残基共价连接,形成稳定荧光复合物 。

偶联后保留凝集素的糖结合活性及染料光学特性。

三、常见问题与避坑指南

1. 荧光信号弱或淬灭

原因:

反复冻融导致染料降解[[1-2,5,16]]。

光照过度(虽具光稳定性,仍需避光操作)。

样本自发荧光干扰(如固定剂残留)。

解决方案:

现配现用:溶解后立即使用,未用完溶液分装冻存(<-20℃)。

优化成像参数:使用670-690 nm波段滤光片,减少曝光时间。

对照实验:添加未标记凝集素竞争性阻断,验证结合特异性。

2. 组织穿透深度不足

原因:非近红外染料(如FITC)穿透力差,CF680设计用于深层成像[[1-2,7]]。

优化建议:

选择薄组织切片(<100μm)或使用多光子显微镜。

结合 荧光分子断层成像(FMT) 提升体内信号量化精度。

3. 非特异性结合

原因:凝集素结合糖基团的广谱性。

避坑措施:

预吸附处理:用无关糖蛋白(如BSA)封闭样本。

严格洗涤:PBS + 0.1% Tween-20冲洗3次。

对照组:注射游离CF680染料或未标记LEL。

四、关联试剂

Cyanine3 NHS ester

磺化Cyanine5.5苯硼酸

AF568 NHS Ester

AF568 马来酰亚胺

Cyanine3 NHS ester

Cyanine7.5 NHS ester

Sulfo-Cyanine5 azide(乙基)

IR825 Biotin,IR-825 Biotin

花菁染料CY3标记的番茄凝集素

Sulfo-Cyanine5 azide(乙基)

Alexa Fluor 350 NeutrAvidin

Cy3 LEL;Cyanine3 Tomato lectin

Sulfo-Cyanine5.5-Phenylboronic Acid

AF568 mal;Alexa Fluor 568 Maleimide

(本文内容由陕西新研博美生物科技有限公司木南整理)

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