61970-00-1,Firefly Luciferase,Recombinant:生产与纯化技术

试剂名称:Firefly Luciferase,Recombinant重组萤火虫荧光素酶

储存:-20℃干燥避光保存至少1年,冰袋运输。

产地:西安强化生物

CAS:61970-00-1

分子量:~60kDa

状态:液体

一、描述与基本特性:

重组萤火虫荧光素酶是一种通过基因工程手段表达的酶,源自北美萤火虫(Photinus pyralis)的荧光素酶基因(luc),通常在大肠杆菌(E. coli)系统中重组表达。

重组表达的优势

稳定性与一致性:相比天然提取的酶,重组技术消除了季节性和地域性差异,确保批次间的高度一致性。

高纯度与活性:典型活性≥1×10¹¹ units/mg蛋白,可冻干保存(冻干粉)或以缓冲液形式(液体)提供。

工程化改良:部分版本通过基因修饰增强热稳定性,适用于需长期保存或高温反应的实验。

【催化机制与生物学功能】

两步催化反应(依赖ATP、Mg²⁺、O₂):

(1) 荧光素 + ATP → 荧光素酶 → 荧光素腺苷酸 + PPi

(2) 荧光素腺苷酸 + O₂ → 氧荧光素 + AMP + 光子(λmax=560 nm)

关键辅因子:Mg²⁺稳定ATP结合,钙离子可加速反应。

生物学功能

报告基因系统:检测启动子活性、转录因子结合、miRNA靶向作用。

ATP定量:灵敏度达1 fmol ATP(0.2 μg酶)。

活体成像:非侵入性监测基因表达。

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二、生产与纯化技术

(一)重组表达系统

表达宿主:大肠杆菌。

载体:pET系列,含组氨酸标签便于纯化。

基因来源:北美萤火虫,与日本萤火虫基因同源性60-80%。

(二)纯化工艺

L344A突变提升热稳定性。

定向进化筛选耐热突变体。

亲和层析:镍柱固定金属离子亲和层析。

收率:约2 mg/L培养液,纯度≥98%。

突变体优化

L344A突变提升热稳定性。

定向进化筛选耐热突变体。

(三)制剂形式

液体:1 mg/mL于Tris-甘油缓冲液,-20℃保存。

冻干粉:含BSA和蔗糖保护剂,复溶于高盐缓冲液。

以上由西安强化生物小编xxn整理

用于科研相关领域,不能用于人体实验!

西安强化生物提供的相关系列:

mFluor Red 700 酸

mFluor Violet 450 酸

mFluor Violet 510琥珀酰亚胺酯

mFluor Violet 540琥珀酰亚胺酯

iFluor 647 alkyne iFluor 647炔烃

ReadiLink mFluor 700抗体标记试剂盒

iFluor 405 maleimide iFluor 405马来酰亚胺

iFluor 460 maleimide iFluor 460 马来酰亚胺

iFluor 555 maleimide iFluor 555马来酰亚胺

iFluor 680 maleimide iFluor 680马来酰亚胺

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iFluor 514 succinimidyl ester iFluor 514琥珀酰亚胺酯

iFluor 555 succinimidyl ester iFluor 555琥珀酰亚胺酯

iFluor 597 succinimidyl ester iFluor 597 琥珀酰亚胺酯

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