试剂名称:Firefly Luciferase,Recombinant重组萤火虫荧光素酶
储存:-20℃干燥避光保存至少1年,冰袋运输。
产地:西安强化生物
CAS:61970-00-1
分子量:~60kDa
状态:液体
一、描述与基本特性:重组萤火虫荧光素酶是一种通过基因工程手段表达的酶,源自北美萤火虫(Photinus pyralis)的荧光素酶基因(luc),通常在大肠杆菌(E. coli)系统中重组表达。
重组表达的优势
稳定性与一致性:相比天然提取的酶,重组技术消除了季节性和地域性差异,确保批次间的高度一致性。
高纯度与活性:典型活性≥1×10¹¹ units/mg蛋白,可冻干保存(冻干粉)或以缓冲液形式(液体)提供。
工程化改良:部分版本通过基因修饰增强热稳定性,适用于需长期保存或高温反应的实验。
【催化机制与生物学功能】
两步催化反应(依赖ATP、Mg²⁺、O₂):
(1) 荧光素 + ATP → 荧光素酶 → 荧光素腺苷酸 + PPi
(2) 荧光素腺苷酸 + O₂ → 氧荧光素 + AMP + 光子(λmax=560 nm)
关键辅因子:Mg²⁺稳定ATP结合,钙离子可加速反应。
生物学功能
报告基因系统:检测启动子活性、转录因子结合、miRNA靶向作用。
ATP定量:灵敏度达1 fmol ATP(0.2 μg酶)。
活体成像:非侵入性监测基因表达。
(一)重组表达系统
表达宿主:大肠杆菌。
载体:pET系列,含组氨酸标签便于纯化。
基因来源:北美萤火虫,与日本萤火虫基因同源性60-80%。
(二)纯化工艺
L344A突变提升热稳定性。
定向进化筛选耐热突变体。
亲和层析:镍柱固定金属离子亲和层析。
收率:约2 mg/L培养液,纯度≥98%。
突变体优化:
L344A突变提升热稳定性。
定向进化筛选耐热突变体。
(三)制剂形式
液体:1 mg/mL于Tris-甘油缓冲液,-20℃保存。
冻干粉:含BSA和蔗糖保护剂,复溶于高盐缓冲液。
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用于科研相关领域,不能用于人体实验!
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