血液基因组DNA小量提取试剂盒说明书-[爱必信absin]

货号： abs60347

快速从抗凝血液(< 1 ml)中纯化获得高质量的基因组DNA。

产品特点：

1. 无RNA酶污染：试剂盒提供的DNA-Only Column使得实验过程中无需额外添加RNA酶即可去除基因组DNA中的RNA，避免实验室遭受外源RNA酶污染。

2. 速度快：Foregene Protease Plus具有比同类蛋白酶更高的活性，消化组织样本速度快；操作简单，基因组DNA提取操作在40分钟内即可完成。

3. 方便：离心操作均在常温，无需4℃低温离心或乙醇沉淀DNA。

4. 安全：无需有机试剂抽提。

5. 质量高：提取获得的基因组DNA片段大、无RNA、无RNA酶、离子含量极低，能满足各种实验的要求。

试剂盒组成：

试剂盒成分100TBuffer BL130 mlBuffer BL230 mlBuffer DC200 mlBuffer PW50 mlBuffer WB130 mlBuffer EB20 mlForegene Protease Plus2.5 mlDNA-Only Column100 套说明书1份

应用

适用于新鲜或冻存的抗凝全血基因组DNA 提取纯化。

使用方法

自备试剂：无水乙醇

使用前请先在Buffer WB1 中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

1. 样品处理

a. 无核红细胞抗凝血液：当样品体积小于200 ul 时，直接加入Buffer BL1 补齐到300 ul，直接进行步骤2。当体积为200-1000 ul 时(若血液体积为500-1000 ul时，可将血液样品平均分成两管)，加入2 倍体积的Buffer DC, 上下颠倒混匀，12,000 rpm(~13,400 ×g) 离心1 min，弃上清，再加入300 ul Buffer BL1，震荡至彻底混匀，进行步骤2。注意：肝素抗凝血，建议使用2 倍体积的Buffer DC 处理后(方法同上)，进行步骤2。

b. 有核红细胞抗凝血液：往1.5 ml 离心管中加入5-20 ul 抗凝血，再加入300 ul Buffer BL1，进行步骤2。

2. 向混合液中加入20 ul Foregene Protease Plus，颠倒混匀，放置于65℃约10 min。

3. 向混合液中，加入300 ul Buffer BL2，涡旋混匀至分层消失，置于65℃放置10 min，期间涡旋混匀数次，溶液应变清亮。注意：在温育过程中涡旋混匀数次，以保证细胞裂解充分。若溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可适当延长时间。当血液体积≤ 200 ul 且未采用Buffer DC 处理，或是样本储存条件不佳时，水浴或金属浴处理后颜色可能为深褐色，注意溶液中应无团块等沉淀。

4. 加入120 ul 无水乙醇，涡旋震荡混匀，此时可能会出现絮状沉淀。

5. 将上一步所得溶液和絮状沉淀移至离心柱(DNA-Only Column) 中，12,000 rpm(~13,400 ×g) 离心30 s-1 min，弃掉收集管中的废液。

6. 往离心柱中加入500 ul Buffer PW，12,000 rpm(~13,400 ×g)离心30 s-1 min，弃掉收集管中的废液。

7. 往离心柱中加入700 ul Buffer WB1，12,000 rpm(~13,400 ×g)离心30 s-1 min，弃掉收集管中的废液。

8. 重复步骤7 一次。

9. 将离心柱放回收集管中，12,000 rpm(~13,400 ×g) 空管离心1 min。

10. 将离心柱移至新的2 ml 离心管中，向膜中央悬空滴加100 ul 已于65℃预热的Buffer EB(切勿将洗脱液添加到压圈上，否则会损失较大体积的洗脱液)，室温放置5 min，12,000 rpm(~13,400 ×g) 离心1 min。再次向膜中央悬空滴加100 ul 已预热的Buffer EB，12,000 rpm(~13,400 ×g) 离心1 min。将两次收集的洗脱液合并。注意：如果希望提高DNA 的浓度，可将第1 次离心得到的溶液重新加回离心柱中，12,000 rpm (~13,400 ×g) 离心1 min。

操作示意图：

储存/保存方法

常温保存，有效期12个月

技术指标

基因组DNA 提取得率和纯度:

血液基因组DNA 提取得率与组织的来源、保存条件、保存时间、用量等因素相关，所得基因组DNA 纯度均满足常规分子生物学实验操作，其OD260/280 在1.7-1.9 之间。

基因组DNA 片段大小:

血液基因组DNA 提取试剂盒是采用硅胶膜柱分离纯化多种样本来源的基因组DNA，纯化获得的基因组DNA 片段大小均在23kb 附近。

注意事项

1. 建议尽量使用EDTA 作为抗凝剂。

2. 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA 片段较小且降低提取得率。

3. 试剂盒使用前，仔细检查Buffer BL1、Buffer BL2 和Buffer PW 中是否有沉淀析出，若有沉淀析出，请将其置于37℃溶解，混匀后再使用。

4. 试剂盒使用前，请务必检查Buffer WB1 是否按说明添加了无水乙醇。Buffer WB1在使用前添加60 ml 无水乙醇。

5. 洗脱体积：Buffer EB 不应少于100 ul，否则会影响DNA 产量。

6. 切记不要在任何Buffer 中添加RNA 酶。

7. 所有离心步骤均为使用台式离心机常温(15-25℃)离心。

8. 所有实验步骤均在常温(15-25℃)进行。

温馨提示：本产品仅作科研实验使用，不支持临床等研究