线粒体作为细胞的“能量工厂”,其功能高度依赖线粒体DNA(mtDNA)的完整性。mtDNA拷贝数(每个细胞中mtDNA的分子数)不仅是评估线粒体功能的金标准,更与衰老、代谢紊乱、神经退行性疾病及癌症的发生发展密切相关。随着精准医学的兴起,mtDNA拷贝数检测技术已成为疾病诊断、机制研究和药物开发的核心工具。
检测原理
试剂盒巧妙运用双色荧光 TaqMan 探针法定量 PCR 技术。
细胞内线粒体检测时,FAM 荧光精准追踪线粒体拷贝数,HEX荧光同步记录细胞数目,二者协同,依托标准曲线,勾勒出线粒体在细胞内的真实分布图。
而游离线粒体检测更是独具匠心,FAM 荧光专注计算线粒体拷贝数,HEX荧光则化身质检员,对游离基因组 DNA 抽提质量严格把关,确保检测结果的可靠性。
基于实时荧光定量PCR(qPCR)的检测方案,通过以下创新实现了技术跃升:
1) 特异性探针设计:针对mtDNA保守区域设计引物与探针,避免核基因组DNA干扰,特异性高达99.9%。
2) 双标准曲线校准:引入梯度稀释的标准品和校正品,构建动态范围覆盖1~10^6拷贝的定量曲线,检测下限低至1拷贝/μL。
3) 自动化数据分析:结合AI算法优化阈值循环(Ct值)判定,减少人为误差,提升重复性(CV值<5%)。
实力见证:科研与临床的双重认可
在细胞内线粒体拷贝数检测的科研战场上,清晰描绘出线粒体拷贝数随年龄增长的变化轨迹,为衰老机制研究提供关键证据。
而在游离线粒体领域,通过严谨的 spearman 相关系数分析,试剂盒精准揭示出游离线粒体与年龄、性别的微妙关系,为相关研究提供了重要参考,助力科研人员深入探究线粒体在不同生理状态下的奥秘。