植物总RNA提取试剂盒(多糖多酚含量低的样本)说明书-[爱必信absin]

货号： abs60359

描述

快速从多糖多酚含量低的植物样本中提取获得高质量的总RNA。

产品特点：

1. 全程常温操作，无需冰浴和低温离心。

2. 整套试剂盒RNase-Free，无需担心RNA降解。

3. DNA-Cleaning Column特异结合DNA，使得试剂盒无需额外添加DNase即可去除基因组DNA污染。

4. RNA得率高：RNA-only Column 和独特配方搭配能高效的纯化RNA。

5. 速度快：操作简便，可在20分钟内完成。

6. 安全：无需有机试剂抽提。

7. 质量高：提取得到的RNA片段纯度高，没有蛋白和其他杂质污染，能够满足下游各种实验应用。

试剂盒组成：

试剂盒成分50T200TBuffer PRL125 ml100 mlBuffer PRL216.5 ml66 mlBuffer PRW125 ml100 mlBuffer PRW224 ml96 mlRNase-Free ddH2O10 ml40 mlRNA-only Column50 套200 套DNA-Cleaning Column50 套200 套说明书1份1份

注：Buffer PRL1 、 PRW1 中含有具刺激性的离液盐，操作时请注意带上手套和进行相关防护措施。

应用

适用于多糖多酚含量低的新鲜或冻存的植物组织样本尤其是新鲜植物叶片组织总RNA的提取纯化。

使用方法

自备试剂：无水乙醇、β-巯基乙醇(β-ME)

使用前请先在Buffer PRL2 和 Buffer PRW2 中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。为了避免样本间交叉污染，每次取样后都需要将取样器材的刃口或与样本直接接触的部位浸入2%次氯酸钠溶液中，反复洗刷数次进行清洗，然后用干净的纸巾擦干残余液体后再进行使用。为了试验方便，也可准备多个取样器材，在使用完后进行统一清洗，确保每一单独样本均使用的是无污染的取样器材。

1. 取500 ul Buffer PRL1 于2 ml 离心管中加入10 ul β-巯基乙醇(需自备)，混匀待用。

2. 取适量新鲜植物叶片或组织，尽量剪碎，置于预冷的研钵中，加入液氮充分研磨。

3.迅速称取50 mg 研磨好的新鲜植物叶片粉末，转移至Buffer PRL1 中剧烈震荡混匀，室温静置 5 min。注意：组织量不要超过50 mg，否则会导致RNA的质量下降。在植物叶片粉末融化之前速度转移，细胞破碎后，在无冷冻环境中，RNA极容易发生降解。

4. (可选步骤) 如果发现组织裂解后的溶液中有比较明显的组织碎片或溶液过于粘稠，12,000 rpm (~13,400×g)常温离心2-5 min，取上清进行下一步操作；如果溶液无可见碎片、澄清，请忽略此步骤。

5. 将所有上清液转移至DNA-Cleaning Column 中 (DNA-Cleaning Column 放入收集管中)，13300 rpm (~17000×g) 离心2 min。移除DNA-Cleaning Column 保留收集管内上清液。注意：植物组织裂解液比较粘稠，在转移液体时可以将枪头尖端剪掉，便于取样。虽然大部分的细胞碎片被截留在DNA-Cleaning Column 膜上，但是还是会有一些微量的细胞碎片会通过DNA-Cleaning Column，在收集管底部以沉淀形式存在。小心地将上清液转移至干净离心管中再进行步骤6，切勿将沉淀吸入上清液中。

6. 小心转移经过DNA-Cleaning Column 离心过滤的上清液到2 ml 新的RNase-Free 离心管(需自备)中，向其中体积应约为500 ul 上清液中加入1.7倍约850 ul 体积 Buffer PRL2 (使用前请确认已按照说明加入无水乙醇)，轻柔混匀以备下面RNA纯化步骤使用。如果出现沉淀，切勿进行离心操作。注意：Buffer PRL2 加入量请按照实际操作过程中上清液的体积进行比例换算加入。例如：500 ul 上清液中加入850 ul Buffer PRL2 (已加入无水乙醇)。混合液可能出现浑浊或絮状沉淀，请直接进行步骤7即可。

7. 将750 ul 上述混合液小心转移至RNA-only Column 中 (RNA-only Column 放入收集管中)，轻轻盖上离心柱盖子，12,000 rpm (~13,400×g) 离心1 min，弃掉收集管中的废液。注意：如果混合液中出现絮状沉淀，请将沉淀一并转移至RNA-only Column 中。

8. 将RNA-only Column 放回收集管中，将剩余混合液全部加入RNA-only Column 中，12,000 rpm (~13,400×g)，离心1 min，弃掉收集管中的废液。

9. 向RNA-only Column 中加入500 ul Buffer PRW1，轻轻盖上离心柱盖子，12,000 rpm (~13,400×g) 离心1 min，弃掉收集管中的废液。注意：离心完成后，小心的移走RNA-only Column，不要让离心柱底部碰触收集管内的废液。步骤9、10、11均需注意此细节。

10. 向RNA-only Column 中加入700 ul 无水乙醇，12,000 rpm (~13,400×g) 离心1 min，弃掉收集管中的废液。

11. 向RNA-only Column 中加入700 ul Buffer PRW2 (使用前请确认已按照说明加入无水乙醇)，12,000 rpm (~13,400×g) 离心1 min，弃掉收集管中的废液。

12. 重复步骤11。

13. 将RNA-only Column 放回收集管中，12,000 rpm (~13,400×g) 空管离心2 min 弃掉收集管。注意：长时间的空管离心以保证清除干净离心柱上的残留乙醇，乙醇残留将会影响下游实验。

14. 将RNA-only Column 转移至新的离心管中，向RNA-only Column 的膜中央滴加50-200 ul 已于65°C 预热的RNase-Free ddH2O (切勿将洗脱液添加到压圈上，否则会损失较大体积的洗脱液)，室温放置2 min。12,000 rpm (~13,400×g) 离心1 min 收集RNA溶液。注意：RNasFree ddH2O 加入体积不应低于50 ul，体积过小会影响洗脱效率。为提高RNA产量，可将离心得到的RNA溶液重新加至RNA-only Column 中，重复步骤14。具体的洗脱效率及RNA浓度之间的关系见RNA洗脱回收效率图。得到的RNA溶液可直接用于下游实验或置于-80°C 保存。由于本试剂盒对RNA二级结构保护较好，建议凝胶电泳之前，先将得到的RNA溶液置于72°C 变性处理5-10 min。

操作示意图：

储存/保存方法

常温保存，有效期12个月

技术指标

RNA提取得率与纯度：

使用植物总RNA提取系列试剂盒可以从多种植物组织中纯化得到的RNA，其产量与植物样本本身、样本初始量、样本新鲜程度、样本保存时间以及操作相关。以下是使用该试剂盒提取50 mg 各种植物样本RNA的得率与纯度，实际操作中，可能与该数据有出入。

新鲜幼嫩叶片 50 mg总RNA产量 (ug) OD260/OD280OD260/OD230烟草27-301.8-2.11.8-2.1番茄32-351.8-2.11.8-2.1大豆31-341.8-2.11.8-2.1玉米15-171.8-2.11.8-2.1油菜8-101.8-2.11.8-2.0水稻15-171.8-2.1 1.8-2.1

注：以上数据均得自于植物新鲜叶片，若是植物叶片较老，或是植物其他部位如叶脉、根茎等抑或是样本保存时间过久，RNA的得率或低于上表中数据。

注意事项

1. 所有实验步骤均在常温(15-25°C)进行(包括离心)切勿使用冰浴和低温(4°C)离心。

2. 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的RNA降解且提取量也会下降。

3. 新鲜植物叶片的用量不要超过50 mg否则会影响RNA产量和纯度。

4. 试剂盒使用前，请在Buffer PRL1 中加入β-巯基乙醇。每500 ul Buffer PRL1 加入10 ul β-巯基乙醇，建议现配现用Buffer PRL1 在加入β-巯基乙醇后可在4°C放置1个月。

5. 试剂盒使用前，请在Buffer PRL2 中添加无水乙醇，加入量请参照试剂瓶上标签。不同规格的试剂盒无水乙醇的添加量见下表：规格无水乙醇添加量50T30 ml200T120 ml

6. 剂盒使用前，请在 Buffer PRW2 中添加无水乙醇，加入量请参照试剂瓶上标签。不同规格的试剂盒无水乙醇的添加量见下表：

规格无水乙醇添加量50T60 ml200T240 ml

7. RNA产率和质量与植物组织样本用量和洗脱体积有关，建议每500 ul Buffer PRL1 使用组织量50 mg。

8. 洗脱体积：洗脱液体积不应少于50 ul，否则会影响RNA回收效率。

9. 请检查试剂盒中的Buffer PRL1 或Buffer PRW1 是否有晶体析出现象，低温存放或室温较低试剂可能会有晶体析出，可将Buffer放置于室温或37°C一段时间，将晶体溶解后混匀再使用。

实验结果图

Plant Total RNA Isolation Kit 处理植物样本，获得的RNA电泳图。

RNA洗脱回收效率图：RNA洗脱回收效率图经过严格多次实验，我们发现纯化RNA的洗脱回收效率与洗脱体系、洗脱次数有关，具体数据见下图表。根据图上所给出的洗脱效率，用户可以根据自己的实验需要选择合适的洗脱体系，以期得到可观的产量的RNA及期望的RNA浓度。上图洗脱回收效率仅供参考，具体的回收洗脱得率以最终实验结果为准，可能会与上图数据有些许出入，偏差在10-20%属于正常情况。

温馨提示：本产品仅作科研实验使用，不支持临床等研究