Concanavalin A-FITC 刀豆球蛋白A-荧光素用于荧光染色和显微成像#科技#球蛋白#染色#荧光#磷脂#细胞

Concanavalin A-FITC，简称 ConA-FITC，是由植物来源的凝集素——刀豆球蛋白A（Concanavalin A, 简称ConA），与荧光素异硫氰酸酯（Fluorescein isothiocyanate，FITC）通过共价结合制备而成的一种荧光标记物。它结合了ConA独特的糖识别特性与FITC的绿色荧光性能，在生物化学、细胞生物学、组织学、糖生物学以及流式细胞术等众多研究领域中具有极高的应用价值。

ConA 是从刀豆（Canavalia ensiformis）的种子中提取得到的一种四聚体蛋白质，分子量约104 kDa。它是一种凝集素（lectin），能特异性识别并结合多种糖类分子，尤其是α-D-甘露糖（α-D-mannose）和α-D-葡萄糖（α-D-glucose）残基。因此，ConA广泛用于检测细胞表面糖链结构、糖蛋白、糖脂等的存在及分布。ConA对细胞表面糖基的识别常与细胞分化、增殖、肿瘤转化、病毒感染等生物学过程密切相关。

FITC 则是荧光染料之一，激发波长（λ_ex）约为 495 nm，发射波长（λ_em）约为 519 nm，发出明亮的绿色荧光。其分子末端带有活泼的异硫氰酸基团（-N=C=S），能够与蛋白质中的伯胺基团（如赖氨酸残基）形成稳定的硫脲键，实现荧光标记。FITC荧光亮度高、易检测，但也存在相对较易光漂白的特点。

ConA-FITC 的制备，通常通过将ConA溶解于碱性缓冲液（如碳酸氢盐缓冲液，pH 8.3），再与FITC溶液混合反应数小时。反应后，通常采用透析或凝胶过滤层析等方式去除游离的未偶联染料，得到纯净的ConA-FITC产物。标记度的控制尤为关键：过高的FITC标记密度可能导致蛋白质构象改变，影响其对糖残基的结合活性；而标记度过低则导致荧光信号不足。

ConA-FITC应用是用于荧光染色和显微成像。由于ConA能特异结合细胞膜上α-D-甘露糖和α-D-葡萄糖残基，ConA-FITC常用于检测细胞表面糖蛋白的分布、分析细胞膜结构、研究细胞间相互作用，以及探索细胞信号传导相关的糖基化修饰。在组织切片染色中，ConA-FITC可用于观察组织中特定糖类的分布，常被用于肿瘤组织的糖谱分析、肝脏、肾脏组织学研究等。

在流式细胞术（Flow Cytometry）中，ConA-FITC用于定量分析细胞表面糖基的表达情况。通过与不同细胞类型结合，分析其荧光强度分布，可以为细胞分型、疾病诊断及免疫学研究提供重要信息。例如，通过ConA-FITC检测外泌体或细胞外囊泡（EVs）表面糖类修饰，已成为近年糖生物学研究的热点。