中文名称:ATTO 647琥珀酰亚胺酯
MF:C46H55N4O5+
MW:743.97
CAS:1351519-86-2
化学结构与性质
ATTO 647N NHS酯是基于高性能远红荧光染料ATTO 647N的衍生物,带有一个活泼的NHS酯基团(N-hydroxysuccinimide ester)。这一结构赋予其能高效与含有游离胺基(如蛋白质、肽链上的赖氨酸残基)进行共价结合的能力。
ATTO 647N核心:苝并咪唑酮衍生结构,提供优异的光学性能和亲水性。
NHS酯活性基团:可在温和条件下与生物大分子的氨基形成稳定酰胺键。
亲水性设计:确保在生物体系中的稳定分散和低非特异性结合。
光学性能优异:高量子产率,良好光稳定性,适合长时间检测。
反应机制与使用方法
ATTO 647N NHS酯通过其活性NHS酯基团,在弱碱性条件(pH 7.5–8.5)下,与蛋白质、抗体、肽、核酸等生物大分子中游离的氨基(主要是赖氨酸的ε-氨基)发生亲核取代反应,形成稳定的酰胺键,实现染料的共价标记。
使用步骤简要说明:
溶解:使用无水DMSO或DMF配制浓缩储备液(1–10 mM);
反应条件:在pH 7.5–8.5的缓冲液(如PBS碳酸盐缓冲液)中进行标记;
反应时间:通常室温下反应30分钟至2小时;
终止反应:加入游离胺类物质(甘氨酸等)终止多余NHS酯反应;
纯化:通过透析、凝胶过滤或高效液相色谱去除未反应染料,得到纯净的标记产物。
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