标题:EvaGreen (20× in Water)
【参数信息】英文名称:EvaGreen (20× in Water)
激发波长:500 nm
发射波长:530 nm
纯度:≥95%
储存条件:-20℃避光干燥
生产厂商:西安强化生物科技
【简单概述】EvaGreen 是新一代双链DNA(dsDNA)结合染料,可实时定量PCR(qPCR)、高分辨率熔解曲线(HRM)分析及数字PCR(ddPCR)等分子生物学应用。
其 "20×水溶液" 指浓缩储存液,使用时需稀释至工作浓度(通常为1×)。
化学本质:绿色荧光核酸染料,激发波长≈500 nm,发射波长≈530 nm(结合DNA时)。
结构特点:由两个单体染料分子通过柔性间隔臂连接成二聚体,形成的"按需释放"(release-on-demand)构象。
作用机制
1. "按需释放"动态结合模型
EvaGreen的作用机制基于其构象转换:
无DNA时:染料分子呈闭合环状构象,无DNA结合活性,荧光背景极低。
有DNA时:构象转为开放线性状态,嵌入dsDNA小沟,荧光强度增强。
动态平衡:PCR扩增过程中,新生成的dsDNA持续触发染料构象转换,实现活性染料的按需供应。
2. 抑制PCR抑制效应的原理
饱和浓度使用:因构象转换机制,EvaGreen可在高浓度下使用,提供强信号的同时不抑制Taq酶活性。
避免染料重分布 :高浓度下染料不易从小扩增子迁移至大扩增子,确保多重PCR中多个扩增子的溶解峰清晰可辨。
(一)实时定量PCR(qPCR)
高灵敏度检测低丰度靶标,适用于基因表达分析。
兼容快速PCR程序(缩短延伸时间)。
(二)高分辨率熔解曲线(HRM)分析
饱和染料浓度下可区分 单碱基突变(SNP) 、甲基化差异。
试剂盒案例:TIANGEN HRM Kit直接集成EvaGreen,简化操作并提升信噪比。
(三) 数字PCR(ddPCR)
行业标准染料:唯一经验证适用于液滴数字PCR的DNA结合染料。
直接定量线粒体DNA,无需核基因参照,减少误差。
(四)其他分子检测技术
等温扩增:实时监测扩增进程。
细胞活力检测:选择性标记死细胞。
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本试剂仅适用于科研实验,敬请知悉。