新物体识别是一种广泛应用于神经科学和认知研究的行为学测试方法,通过量化动物对新旧物体的探索偏好来评估其记忆能力。主要用于评估阿尔茨海默症等病模型的记忆障碍,以及药或基因干预对认知功能的影响。
一、实验原理与核心参数
认知检测机制:利用动物自发探索新物体的本能,通过对比其对熟悉物体(Familiar Object)与新物体(Novel Object)的探索时间差异,评估短期/长期记忆能力。
关键指标:
认知指数(RI):RI = 新物体探索时间 / (新物体探索时间 + 熟悉物体探索时间) × 100%。
正常判断标准:健康小鼠RI > 65%(RI < 50%提示认知障碍)。
二、标准化操作流程
阶段1:适应性准备
动物筛选
选用同龄同性小鼠(推荐12-14周龄C57BL/6J),每组≥8只;阿尔茨海默症模型可用APP/PS1转基因鼠。
环境适应:测试前24小时将动物移至实验房间,适应光线、气味及噪音。
设备与物体准备
实验箱规格:
小鼠:25×25×40cm透明亚克力箱体,避免反光材质。
光源:20-30勒克斯漫反射照明(避免直射强光)。
物体要求:
材质:无味塑料/陶瓷/木质,小鼠适用直径3-4cm。
固定:双面胶加固防止移动或倾倒。
阶段2:训练期(熟悉期)
放置两个相同物体(A与B)于箱内,距侧壁10cm,对称摆放。
将小鼠背向物体放入箱体中心,自由探索5分钟。
记录双侧物体总探索时间(鼻尖接触物体或距离≤2cm视为探索)。
阶段3:测试期(记忆检测)
延迟时间控制:
短期记忆:训练后1小时测试。
长期记忆:24小时或更久(可延至7天)。
物体替换:将一侧物体替换为外形/纹理差异显著的新物体(如柱状→锥状)。
记录5分钟内对新/旧物体的探索时间,计算RI指数。
三、注意事项
环境控制
气味去除:每次测试前用肥皂水+70%乙醇双重清洁箱体及物体,除残留气味。
物理参数:维持温度22±1℃、湿度50±5%、背景噪音<40分贝。
动物管理
应激:提前3天每日抚摸小鼠1分钟,减少操作焦虑。
性别特异性:雌鼠需处于非发情期(避免波动干扰探索行为)。
陌生鼠配对:同批次、同性别、体重差异<10%,防止攻击行为。
数据采集规范
行为判定:
探索:鼻尖指向物体或主动嗅探。
无效行为:倚靠物体休息、爬过物体未嗅探。
视频分析:
使用专业软件(如ANY-maze),分辨率≥1080p,帧率≥30fps。
人工复核软件识别结果,校正误判的探索行为。