标题:FDG (Fluorescein di(β-D-galactopyranoside)) 荧光素二(β-D-吡喃半乳糖苷)
【🍬参数信息】英文名称:Fluorescein di(β-D-galactopyranoside)
中文名称:荧光素二(β-D-吡喃半乳糖苷)
CAS NO:17817-20-8
分子式:C32H32O15
分子量:656.59
状态:浅黄色固体
Emission (Em) :520
Excitation (Ex):488
摩尔吸光系数:80000 cm-1M-1(0.1N NaOH)
光量子产率:0.95(0.1N NaOH)
纯度:≥95%
储存条件:-20℃避光干燥
生产厂商:西安强化生物科技
FDG(Fluorescein di(β-D-galactopyranoside))是一种人工合成的荧光底物,其结构由荧光素核心通过糖苷键连接两个β-D-吡喃半乳糖基团组成。
被β-半乳糖苷酶水解后会释放出荧光素,激发和发射波长分别为490/514nm,产生的荧光与酶活力成正比。
FDG主要用于以β-半乳糖苷酶(LacZ)作为报告基因的转染细胞内基因表达水平的检测。
FDG能进入活细胞,用于哺乳动物细胞和革兰氏阴性菌中通过流式细胞术来检测β-半乳糖苷酶活性。
FDG也能用于显色法的方式来检测β-半乳糖苷酶活性,因为酶代谢产物-荧光素呈现大的摩尔吸光系数,但是,基于荧光素的测定法比基于吸光度的测定法灵敏度高几个数量级。
【使用方法】体外研究
衰老相关 β-半乳糖苷酶 (SA-βG) 活性测定。
将细胞 (每孔 5×103 个细胞) 培养于 96 孔板中。
用 PBS 清洗三次。
在含有 2% 甲醛和 0.2% 戊二醛中固定 5 分钟。
用 PBS 清洗三次。
将 100 μL 反应缓冲液 (即不含 X-Gal 的染色液) 加入每孔中 (包含 3.7 mL 0.2 M 柠檬酸、6.3 mL 0.4 M Na2HPO4 (柠檬酸-磷酸盐缓冲液)、1 mL 100 mM 铁氰化钾、1 mL 100 mM 亚铁氰化钾、 使用 0.6 mL 5 M NaCl、0.2 mL 0.2 M MgCl2 和 7.2 mL 去离子水,总体积为 20 mL)。
每孔加入 10 μL 2 mM FDG,在 37°C 避光条件下孵育 24 小时,无需 CO2 供应。
使用荧光计 (Ex/Em = 485/535 nm) 测量荧光素荧光。
【相关试剂】iFluor594 Phalloidin
iFluor 555 Phalloidin
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Prostaglandin E3
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碘化乙啶(HI),Ethidium Iodide
Alexa Fluor 405-Streptavidin
Alexa Fluor 647-Streptavidin
Ethidium Homodimer 1 (EthD-1)
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EGTA AM,CalciumChelator钙螯合剂
Firefly Luciferase Reporter Gene Assay Kit
Aminoethoxyvinylglycine (AVG) Hydrochloride
Indo-1,AM,Cell Permeant 钙离子荧光探针 112926-02-0
Fluo-8 Potassium Salt, Cell lmpermeant 钙离子荧光探针
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本试剂仅适用于科研实验,敬请知悉。