Crosslinked Allophycocyanin交联别藻蓝蛋白的蛋白交联步骤

标题：Crosslinked Allophycocyanin交联别藻蓝蛋白

英文名称：Crosslinked Allophycocyanin

中文名称：交联别藻蓝蛋白

激光通道：633-647nm

Ex /Em：651/660nm

滤片设置：Cy5

摩尔吸光系数：700,000 (cm-1M-1)

光量子产率：0.68

分子量：~105,000

外观：溶液

纯度：≥95%

交联别藻蓝蛋白是通过化学交联技术对天然别藻蓝蛋白（Allophycocyanin, APC）进行修饰的产物。

天然APC是从红藻、蓝绿藻（如螺旋藻）中提取的藻胆蛋白（Phycobiliprotein），由α和β亚基以(αβ)₃形式组成三聚体结构，分子量约105 kDa。

每个亚基含一个藻蓝素发色团（Phycocyanobilin, PCB），具有高光吸收率和高荧光量子产率。

交联的核心操作：通过化学方法（如双功能试剂SMCC/SPDP）在α和β亚基间形成共价键（如硫醚键），增强其结构稳定性，同时保留天然APC的光谱特性。

蛋白交联步骤（以抗体标记为例）

硫醇化蛋白X（如抗体）：

用SPDP（succinimidyl 3-(2-pyridyldithio)propionate）修饰赖氨酸残基，摩尔比5:1–10:1（SPDP:蛋白）。

还原剂TCEP解离保护基团，生成游离硫醇（-SH）。

马来酰亚胺化蛋白Y（CL-APC）：

用SMCC（succinimidyl maleimide）修饰，摩尔比10:1–20:1（SMCC:蛋白）。

偶联反应：

将硫醇化蛋白X与马来酰亚胺化CL-APC按1:1摩尔比混合，室温反应3小时形成稳定硫醚键。

用NEM（N-ethylmaleimide）封闭剩余硫醇基团，避免非特异性结合。

FM 2-10膜电位荧光探针

FM 4-64膜电位荧光探针

Chloramphenicol, USP Grade

Carbenicillin，Disodium Salt

Tide Quencher 6WS马来酰亚胺

Amyloid β Peptide 1-42，Human

pCAMBIA1305.1 Plant Expression Vector

pCAMBIA1305.2 Plant Expression Vector

E coli C41(DE3) Strain大肠杆菌C41(DE3)甘油菌

SYTO 9 (10,000× in DMSO) LAMP用核酸染料

N-Acetyl-D-lactosamine (LacNAc) N-乙酰-D-乳糖胺

6'-Sialyllactose Sodium Salt (6'-SL) 6'-唾液乳糖钠盐

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本试剂仅适用于科研实验，敬请知悉。