7-AMCA NHS ester,蓝色荧光染料的反应后处理方法
7-AMCA NHS ester(7-Amino-4-methylcoumarin-3-acetic acid N-hydroxysuccinimide ester)是一种蓝色荧光染料的活性酯形式,具有优异的标记能力和化学反应活性,常用于蛋白质、多肽、核酸等生物分子的荧光标记与检测。该化合物以其高度反应性和较好的光学性能,在分子成像、免疫分析、亲和层析等研究中具有实用价值。其合成过程涉及对7-AMCA分子的改性,通过形成NHS酯结构,使其具备与氨基反应的能力,从而实现高效、特异的共价连接。
一、合成思路概述
7-AMCA NHS ester的合成主要基于7-AMCA母体结构的官能团活化,核心在于将羧酸基团(–COOH)转化为NHS酯,以增强其与胺类化合物之间的偶联效率。典型的合成步骤包括以下几个环节:
1. 起始原料的准备
合成起始物为7-氨基-4-甲基香豆素-3-乙酸(7-AMCA),这是一种含有氨基与羧基的香豆素类荧光分子。其结构中包含芳香系统与取代基,具备良好的荧光性质,是后续修饰反应的基础骨架。
2. 羧酸基团活化
为了使羧酸基团具备反应性,需引入脱水剂,如DCC(N,N'-Dicyclohexylcarbodiimide)或EDC(1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide)。这些试剂可活化羧酸基团形成O-酰脲中间体,为NHS酯的生成提供反应平台。
3. 引入NHS基团
在上述活化中间体存在的条件下,加入N-羟基琥珀酰亚胺(NHS),其与酰脲中间体反应,取代生成稳定的NHS酯结构。这一反应一般在干燥的二氯甲烷、DMF或THF等有机溶剂中进行,温度控制在室温至40°C,有助于提高产率。
4. 反应后处理
反应结束后,通过减压浓缩溶剂、萃取或柱层析等方式对产物进行提纯,去除未反应的起始物、副产物及溶剂残留。最终获得的7-AMCA NHS ester呈淡黄色或类白色固体,可用于后续的偶联反应。
二、结构分析与反应活性
合成得到的7-AMCA NHS ester分子包含三大功能域:
香豆素荧光核心:该结构提供荧光发射源,具有较强的激发与发射效率,激发波长约在350 nm,发射波长约在445 nm;
乙酸链连接臂:通过酰胺或酯键与目标分子连接,提供一定柔性与空间位阻调节;
NHS酯活性端:具备较高的反应性,能与蛋白质、肽链或其他分子表面暴露的胺基发生快速、高效的亲核取代反应。
产品名称:7-AMCA NHS ester
纯度:95%+
规格:mg/g
用途:科研
厂家:齐岳生物
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仅用于科研,不能用于人体。小编axc