CD63 分子于 1980 年首次在血小板表面被鉴定，最初被命名为 “血小板糖蛋白 4（GP4）”，后因纳入白细胞分化抗原分类体系而更名为 CD63。人类 CD63 的编码基因定位于第 12 号染色体（12q13.13），基因全长约 8.5kb，包含 7 个外显子和 6 个内含子，编码由 238 个氨基酸残基组成的四跨膜糖蛋白，分子量约 53-58kDa（因糖基化修饰存在差异）。从进化角度来看，CD63 具有较高的物种保守性 —— 人类与小鼠 CD63 的氨基酸序列同源性达 82%，与斑马鱼、果蝇等低等生物的同源性也超过 60%，这种进化保守性提示其在细胞基础生命活动中的核心功能不可替代。
从分子结构来看，CD63 分子呈现典型的 “四跨膜蛋白（tetraspanin）” 结构特征，同时兼具溶酶体膜蛋白的独特属性，整体分为胞外区、跨膜区、胞内区三部分：
- 跨膜区是 CD63 分子的核心结构基础，由 4 个紧密排列的 α- 螺旋跨膜结构域（TM1-TM4）组成，4 个跨膜域形成 “疏水通道”，介导 CD63 与细胞膜、溶酶体膜等膜结构的结合；同时，TM1-TM4 之间通过氨基酸残基的相互作用，形成 “tetraspanin 富集微区（Tetraspanin-Enriched Microdomains，TEMs）”，这一微区是 CD63 与其他膜蛋白（如整合素、受体酪氨酸激酶）相互作用的 “分子平台”，参与信号传导与蛋白复合物组装。
- 胞外区分为两个部分：小胞外环（Small Extracellular Loop，SEL）和大胞外环（Large Extracellular Loop，LEL）。其中，LEL 是 CD63 发挥功能的关键区域，长度约 100 个氨基酸残基，富含半胱氨酸（共 8 个），通过二硫键形成稳定的三维结构；LEL 上还存在 3 个 N - 糖基化位点（Asn152、Asn172、Asn194），糖基化修饰不仅能增强 CD63 的结构稳定性，还能影响其与配体的结合效率及在膜上的定位；此外，LEL 是 CD63 作为细胞表面标志物的核心区域，临床检测中使用的 CD63 特异性抗体多靶向该区域。
- 胞内区包括 N 端胞内尾（N-terminal Cytoplasmic Tail）和 C 端胞内尾（C-terminal Cytoplasmic Tail），其中 C 端胞内尾含有 “溶酶体靶向信号（Lysosomal Targeting Signal）”—— 即 YXXΦ 基序（Tyr233-X-X-Phe236，X 为任意氨基酸），这一基序通过与溶酶体相关衔接蛋白（如 AP-3 复合物）结合，介导 CD63 从高尔基体向溶酶体的转运；同时，C 端胞内尾还含有多个丝氨酸（Ser）和苏氨酸（Thr）磷酸化位点，磷酸化修饰可调控 CD63 的膜定位（如从溶酶体向细胞膜转移），进而影响其功能发挥。
在组织分布与表达特征上，CD63 分子呈现 “广泛分布，膜结构特异性” 的特点：在正常生理状态下，CD63 几乎在全身所有组织细胞中均有表达，但主要定位于细胞内的膜结构，如溶酶体、晚期内体、多泡体（MVBs）、外泌体及血小板的 α 颗粒膜上；在细胞表面，CD63 的表达量较低，但在特定细胞活化或生理过程中会显著上调，如活化的血小板（血小板激活后，α 颗粒膜与细胞膜融合，CD63 转移至细胞表面，成为血小板活化的标志）、活化的巨噬细胞（吞噬过程中，溶酶体膜与吞噬体膜融合，CD63 表达于细胞表面）、肥大细胞（脱颗粒过程中 CD63 向细胞膜转移）。从组织层面来看，CD63 在造血组织（骨髓、脾脏、胸腺）、分泌型组织（胰腺、唾液腺）及上皮组织（肠道上皮、肺泡上皮）中表达水平较高 —— 造血组织中的 CD63 参与血细胞的成熟与活化（如血小板生成、单核细胞分化）；分泌型组织中的 CD63 参与分泌颗粒的形成与释放；上皮组织中的 CD63 则参与黏膜屏障功能与物质转运。在病理状态下，CD63 的表达与定位会发生显著改变：例如在乳腺癌、肺癌、结直肠癌等恶性肿瘤中，肿瘤细胞表面及分泌的外泌体中 CD63 表达量显著升高，与肿瘤细胞的侵袭、转移能力呈正相关；在类风湿关节炎患者的滑膜组织中，活化的滑膜细胞与巨噬细胞表面 CD63 表达上调，参与炎症因子的释放与关节损伤；在感染性疾病（如结核分枝杆菌感染）中，被感染的巨噬细胞内 CD63 的溶酶体定位异常，导致溶酶体与吞噬体融合受阻，细菌在细胞内持续存活。
在指标检测层面，CD63 的表达水平、膜定位及外泌体关联量是评估细胞活化状态、诊断疾病的重要指标，常用检测技术包括流式细胞术（FCM）、免疫荧光染色（IF）、Western Blot（蛋白质印迹法）、酶联免疫吸附试验（ELISA） 及免疫电镜（IEM）。其中，流式细胞术是检测细胞表面 CD63 最常用的方法，通过 CD63 特异性荧光抗体染色，可定量分析活化细胞（如血小板、巨噬细胞）表面 CD63 的表达比例 —— 例如在心血管疾病中，外周血中 CD63 阳性的活化血小板比例升高，提示血栓形成风险增加；免疫荧光染色能直观观察 CD63 的细胞内定位，如在正常细胞中，CD63 与溶酶体标志物（如 LAMP1）共定位，而在肿瘤细胞中，CD63 则更多地与细胞膜或外泌体标志物（如 CD9）共定位；Western Blot 可检测细胞或组织中 CD63 蛋白的总表达量，结合亚细胞组分分离技术，还能分析 CD63 在不同膜结构（溶酶体膜、细胞膜、外泌体膜）中的分布比例；ELISA 则常用于检测体液（血清、血浆、尿液）或细胞培养上清中与外泌体结合的 CD63 含量 —— 例如在肿瘤患者中，血清外泌体 CD63 水平显著高于健康人群，可作为肿瘤诊断的潜在生物标志物；免疫电镜则能在超微结构水平定位 CD63，如观察外泌体膜上 CD63 的分布，常用于外泌体研究中验证其纯度与来源。
生理功能
CD63 分子的生理功能高度聚焦于细胞内膜转运、信号传导与免疫调控，通过参与溶酶体功能维持、外泌体分泌、细胞活化等过程，在细胞生理活动与组织稳态中发挥多维度作用，其核心功能可归纳为以下四大类：
1. 溶酶体与内体系统功能的 “维持者”：调控膜转运与物质降解
溶酶体是细胞内 “物质降解与回收中心”，而 CD63 作为溶酶体相关膜蛋白，是维持溶酶体结构完整与功能正常的 “关键分子”，其作用机制主要体现在以下两方面：
（1）介导溶酶体靶向转运与膜融合
CD63 通过 C 端胞内尾的 YXXΦ 溶酶体靶向信号，参与自身及其他溶酶体蛋白的靶向转运：在高尔基体中，CD63 与 AP-3 衔接蛋白复合物结合，AP-3 将 CD63 包裹进运输囊泡，随后囊泡与晚期内体融合；晚期内体进一步成熟为溶酶体，CD63 最终定位于溶酶体膜上。这一转运过程不仅确保 CD63 在溶酶体中的正确定位，还能辅助其他溶酶体酶（如酸性磷酸酶）的靶向转运，维持溶酶体的降解功能。此外，在细胞吞噬过程中，CD63 通过与膜融合相关蛋白（如 SNARE 复合物）相互作用，促进溶酶体与吞噬体的融合 —— 当巨噬细胞吞噬病原体（如细菌）后，吞噬体膜上会逐渐招募 CD63，CD63 通过 LEL 结构域与溶酶体膜上的蛋白结合，启动 SNARE 复合物介导的膜融合，形成吞噬溶酶体；吞噬溶酶体内的酸性环境与水解酶可将病原体降解，完成 innate 免疫防御。若 CD63 功能缺失（如 CD63 基因敲除小鼠），溶酶体与吞噬体的融合效率会下降 50% 以上，导致巨噬细胞无法有效降解病原体，易发生慢性感染。
（2）维持溶酶体膜稳定性与酸性环境
CD63 通过与溶酶体膜上的其他蛋白（如 LAMP1、LAMP2）相互作用，增强溶酶体膜的稳定性：CD63 的跨膜域与 LAMP1 的跨膜域形成复合物，减少溶酶体膜的流动性，防止溶酶体内酸性水解酶泄漏到细胞质中（水解酶泄漏会导致细胞自噬或坏死）；同时，CD63 的糖基化修饰能增强溶酶体膜对酸性环境的耐受性，维持膜结构在低 pH 值（溶酶体内部 pH 约 4.5-5.5）下的完整性。此外，CD63 还能通过调控溶酶体膜上的质子泵（如 v-ATP 酶）活性，维持溶酶体内部的酸性环境 ——CD63 与 v-ATP 酶的亚基结合，增强其将质子泵入溶酶体的效率，确保水解酶处于最佳活性状态；若 CD63 表达下调，溶酶体内 pH 值会升高，水解酶活性下降，导致细胞内衰老细胞器与异常蛋白无法有效降解，引发 “溶酶体贮积症” 样表型。
2. 外泌体形成与功能的 “关键参与者”：调控细胞间通讯的 “分子载体”
外泌体是细胞分泌的直径约 30-150nm 的膜囊泡，富含蛋白质、RNA 等生物分子，是细胞间通讯的重要 “载体”，而 CD63 是外泌体形成、分泌与功能发挥的核心调控分子：
（1）介导外泌体的形成与分泌
外泌体起源于细胞内的多泡体（MVBs），当 MVBs 与细胞膜融合后，其内部的囊泡释放到细胞外，形成外泌体。CD63 在这一过程中扮演 “分选与组装” 的角色：首先，在 MVBs 形成阶段，CD63 通过 LEL 结构域与细胞内的脂质（如胆固醇、神经酰胺）结合，促进 MVBs 膜的内陷，形成腔内囊泡（ILVs）；同时，CD63 通过与泛素化蛋白结合，将特定蛋白（如信号分子、受体）分选到 ILVs 中，确保外泌体的蛋白组成具有功能特异性。其次，在 MVBs 与细胞膜融合阶段，CD63 通过 C 端胞内尾的磷酸化修饰，与细胞膜上的 SNARE 复合物结合，促进 MVBs 与细胞膜的融合效率，加速外泌体释放。研究表明，在 CD63 基因敲除细胞中，外泌体的分泌量会减少 40%-60%，且外泌体中关键信号蛋白的含量显著下降，提示 CD63 对维持外泌体正常分泌与功能至关重要。
（2）调控外泌体介导的细胞间通讯
外泌体通过将携带的生物分子传递给靶细胞，调控靶细胞功能，而 CD63 是外泌体与靶细胞结合及内容物释放的 “关键介导者”：一方面，外泌体膜上的 CD63 通过 LEL 结构域与靶细胞表面的受体（如整合素、硫酸肝素蛋白多糖）特异性结合，介导外泌体与靶细胞的黏附；例如在肿瘤微环境中，肿瘤细胞分泌的外泌体通过 CD63 与血管内皮细胞表面的整合素结合，促进外泌体被内皮细胞吞噬，进而调控内皮细胞增殖，促进肿瘤血管生成。另一方面，CD63 通过促进外泌体与靶细胞内体的融合，加速内容物释放 —— 外泌体被靶细胞吞噬后，会进入内体系统，外泌体膜上的 CD63 与内体膜上的 LAMP1 结合，促进外泌体与内体膜的融合，将携带的 mRNA、miRNA、蛋白质等内容物释放到靶细胞细胞质中，调控靶细胞的基因表达与功能；例如在免疫应答中，树突状细胞分泌的外泌体通过 CD63 介导的内容物释放，将抗原肽 - MHC 复合物传递给 T 细胞，激活 T 细胞免疫应答。
3. 细胞活化与信号传导的 “调控者”：参与免疫细胞与造血细胞功能
CD63 通过与细胞表面及细胞内的信号分子相互作用，调控免疫细胞、造血细胞的活化与功能，成为细胞信号传导的 “重要节点”：
（1）调控免疫细胞活化与炎症反应
在 innate 免疫细胞中，CD63 是调控细胞活化与炎症因子释放的关键分子：在巨噬细胞中，当细胞受到病原体刺激（如 LPS）时，CD63 会从溶酶体转移至细胞膜，通过与 TLR4（Toll 样受体 4）结合，增强 TLR4 介导的 NF-κB 信号通路活化，促进 TNF-α、IL-6 等促炎细胞因子的分泌；同时，CD63 还能通过调控溶酶体与吞噬体的融合，增强巨噬细胞对病原体的降解效率，减少炎症因子的过度释放。在肥大细胞中，CD63 参与脱颗粒过程的调控 —— 当肥大细胞受到过敏原刺激时，CD63 通过与细胞内的微管蛋白结合，促进分泌颗粒向细胞膜移动，加速组胺、白三烯等炎症介质的释放，启动过敏反应；若 CD63 功能缺失，肥大细胞脱颗粒效率下降，过敏反应显著减弱。
在 adaptive 免疫细胞中，CD63 主要参与 T 细胞与 B 细胞的活化与增殖：在 T 细胞中，CD63 通过与 TCR 复合物中的 CD3 分子结合，增强 TCR 介导的信号通路活化，促进 T 细胞增殖与细胞因子分泌；例如在 T 细胞受到抗原刺激时，CD63 的表达量会上调，与 CD3 形成复合物，激活 ZAP-70、PLC-γ 等信号分子，增强 T 细胞活化效率。在 B 细胞中，CD63 通过与 BCR 复合物结合，调控 B 细胞的活化与抗体生成 —— 当 B 细胞识别抗原后，CD63 会与 BCR 共定位到脂筏结构中，增强 BCR 介导的 Ca²⁺信号，促进 B 细胞增殖与抗体类别转换。
（2）调控造血细胞成熟与功能
在造血系统中，CD63 参与血小板、红细胞等造血细胞的成熟与功能维持：在血小板生成过程中，巨核细胞通过胞质分裂形成血小板，CD63 定位于巨核细胞的 α 颗粒膜上，随着血小板的成熟，α 颗粒膜上的 CD63 逐渐富集；当血小板受到刺激（如凝血酶）活化时，α 颗粒膜与血小板细胞膜融合，CD63 转移至细胞表面，成为血小板活化的标志性分子；同时，CD63 通过与血小板表面的整合素 αIIbβ3 结合，增强血小板的黏附与聚集能力，促进血栓形成。在红细胞成熟过程中，CD63 参与红细胞内体系统的功能维持 —— 红细胞前体在成熟过程中会通过内体 - 溶酶体系统清除多余的细胞器（如线粒体、核糖体），CD63 通过调控溶酶体的降解功能，确保红细胞成熟过程中细胞器的有效清除；若 CD63 功能异常，红细胞内会残留过多细胞器，导致红细胞功能异常，引发贫血。
