人类大脑由近千亿个神经元组成，这些微小的细胞通过复杂的连接网络，掌控着我们的思维、记忆、情感和行为。解密神经元的功能和机制，不仅是理解人类意识与智能起源的关键，更是攻克阿尔茨海默病、帕金森病、自闭症等神经系统疾病的必由之路。
而要深入研究神经元，首先需要获得高质量的原代神经元细胞。相比于传代细胞系，原代神经元保持了更接近体内状态的生理特性，能够更真实地反映神经元的生物学行为，成为神经科学研究不可或缺的重要工具。
二、胶原酶：神经元提取的“温柔之手”在传统的神经元提取方法中，常常使用胰蛋白酶进行组织消化。然而胰蛋白酶攻击性过强，容易损伤神经元表面重要的受体和离子通道，影响细胞功能。
胶原酶作为一种高度特异性的蛋白酶，能够选择性降解胶原蛋白——这种在细胞间质中丰富存在的蛋白质，同时对细胞膜蛋白的影响十分小。这一特性使其成为神经元提取的理想工具：
- 温和有效：特异性靶向胶原蛋白，保护神经元完整性
- 保持功能：保留神经元表面受体和通道蛋白
- 提高得率：减少细胞损伤，提高活细胞数量
- 纯度更高：减少非神经细胞的污染
Ya-Tin Lin[1] 等人在“Dorsal Root Ganglia Isolation and Primary Culture to Study Neurotransmitter Release”研究中成功从大鼠背根神经节（DRG）中分离原代神经元，并研究神经肽物质（NPFFR2）刺激诱导神经元细胞的神经递质释放。
实验条件（简化步骤）
- 将预处理好的大鼠神经组织使用1 mg/mL的胶原酶IA溶液（也可同Nordmark Collagenase NB4代替）在37℃孵育箱中孵育30min；
- 移除胶原酶溶液，使用PBS或HBSS缓冲溶液洗涤DRG，累计洗涤3次；
- 将步骤2中获得的DRG用0.05% trypsin-EDTA溶液在37℃孵育箱中孵育30min；
- 收获细胞，并接种、培养。
实验结果展示（部分）
图1. DRG培养物的细胞形态学特征
上图展示了从DRG中分离的神经细胞培养物第1天至第3天的DRG神经元的细胞学形态，并成功监测轴突形成及延伸。
图2. DRG神经元细胞的细胞形态学特征
上图展示了DAPI染色、CGRP蛋白染色的分析结果，CGRP蛋白在神经元胞体和轴突纤维中表达，可以用于标记神经元细胞。如图2所示“→”所示部分为神经元细胞，“△”所示部分为小角质细胞；DRG培养物含有感觉神经元和卫星胶质细胞。卫星胶质细胞为神经元提供代谢支持，并维持神经元功能。
为何全球神经科学家青睐胶原酶？在众多胶原酶产品中，Nordmark胶原酶凭借其以下优势正逐渐成为领域内的“黄金标准”：
- 严格质控：确保批间一致性，让实验结果稳定、可重复
- 特异性强：精准作用于胶原蛋白，避免「误伤」细胞本身，提取的神经元状态更佳、突触生长更旺盛
- 活性稳定：经特殊工艺处理，酶活性持久稳定，解离效率大幅提升
- 可供参考的研究案例
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[1] Lin, Y., Chen, J. Dorsal Root Ganglia Isolation and Primary Culture to Study Neurotransmitter Release. J. Vis. Exp. (140), e57569, doi:10.3791/57569 (2018).
