FITC-PEG-FITC，合成步骤概述，双端荧光标记聚合物
FITC-PEG-FITC 是一种在 PEG 链两端均引入异硫氰基荧光素（FITC）的双端荧光标记聚合物。该分子结合了 PEG 的水溶性、柔韧性和空间保护作用，以及 FITC 的荧光标记功能，可用于双端标记的纳米载体、交联材料、生物分子标记及荧光追踪研究。合成 FITC-PEG-FITC 的关键在于高效偶联两端 FITC 分子，同时控制 PEG 链长度和反应条件，以保证结构均一性和荧光活性。
一、原料准备
聚乙二醇（PEG）
通常选择末端为羟基（–OH）的线性 PEG，分子量可根据应用需求选择，例如 2 kDa、5 kDa 或 10 kDa。
PEG 需干燥处理，以防水分影响异硫氰基反应。
异硫氰基荧光素（FITC）
FITC 含活泼异硫氰基（–N=C=S），易与亲核基团（–OH 或 –NH2）反应形成稳定的硫代氨基键。
可购买高纯度 FITC，并溶解于干燥有机溶剂（如 DMSO 或 DMF）。
催化剂与缓冲体系
偶联反应通常在弱碱性条件下进行（pH 8–9），以提高羟基亲核性。
可使用碳酸氢钠或三乙胺（TEA）调节溶液碱性。
产品名称：FITC-PEG-FITC
纯度：95%+
规格：mg/g
用途：科研
厂家：齐岳生物
二、合成步骤概述
PEG 干燥与溶解
将 PEG 在真空或干燥条件下除水，得到干燥的 PEG 粉末。
溶解于干燥的有机溶剂（如 DMF 或 DMSO），确保体系无水分，以避免 FITC 异硫氰基水解。
首次 FITC 偶联
将适量 FITC 溶液加入 PEG 溶液中，末端羟基与 FITC 异硫氰基在碱性条件下反应形成硫代氨基键。
反应通常在室温避光下进行 12–24 小时，以保证完全偶联并维持荧光活性。
为防止副反应，可采用 FITC 轻度过量（摩尔比约 1.1–1.2:1）。
二端 FITC 偶联
待第一端偶联反应完成后，可通过纯化去除未反应 FITC 或直接加入第二端 FITC。
第二端 FITC 的偶联与第一端类似，需保持弱碱性环境，并充分搅拌。
双端偶联完成后，生成 FITC-PEG-FITC 成品。
三、纯化步骤
透析或超滤
反应完成后，将产物溶液置于透析膜中（MWCO 1–3 kDa），去除未反应的 FITC 和低分子杂质。
可连续透析 24–48 小时，定期更换去离子水或缓冲液，提高纯度。
凝胶渗透色谱（GPC）
根据分子量差异进一步纯化 FITC-PEG-FITC。
同时可获得分子量分布信息（Mw、Mn）和多分散性（PDI），确认 PEG 链的均一性。
沉淀法（可选）
在乙醇或乙醚中沉淀 PEG 偶联产物，而未反应 FITC 保留在溶液中，可提高粗纯度。
四、表征方法
紫外-可见光谱（UV-Vis）
测定 FITC 吸收峰（约 495 nm），确认偶联成功。
与标准曲线对比，可估算每摩尔 PEG 偶联的 FITC 数量。
荧光光谱（Fluorescence Spectroscopy）
测定发射波长（约 520 nm），评估荧光强度和稳定性。
核磁共振（NMR）
^1H NMR 可显示 PEG 链和 FITC 芳香环特征峰，确认双端偶联。
质谱（MALDI-TOF 或 ESI-MS）
可准确测定 FITC-PEG-FITC 分子量，确认是否为双端偶联产物。
五、注意事项
防止荧光猝灭
避光操作，避免高温和强氧化环境，以保持 FITC 荧光活性。
水分控制
FITC 异硫氰基易被水解，反应前 PEG 和溶剂必须干燥。
反应比例控制
FITC 与 PEG 摩尔比需适中，避免多余 FITC 造成副产物或荧光淬灭。
pH 调控
反应环境应保持弱碱性（pH 8–9），促进羟基亲核性并防止 FITC 自发分解。
六、应用价值
双端荧光标记
两端均为 FITC，使 PEG 链具有双向可视化功能，可用于交联材料或双端标记纳米载体。
PEG 保护
PEG 链提供水溶性和空间隔离，减少非特异性结合，增加生物相容性。
纳米材料及药物载体修饰
FITC-PEG-FITC 可修饰脂质体、微粒、蛋白质或聚合物载体，实现荧光追踪与药物递送功能。
七、总结
FITC-PEG-FITC 的合成概述如下：
原料准备：干燥 PEG 和高纯 FITC；
双端偶联：先偶联一端 FITC，再偶联另一端，在弱碱性有机溶剂中室温反应 12–24 小时；
纯化：透析、GPC 和/或沉淀法去除未反应 FITC 和低分子杂质；
表征：UV-Vis、荧光光谱、NMR、质谱确认偶联成功和纯度；
注意事项：控制光照、水分、pH 和 FITC 过量，保证荧光活性和结构均一性；
应用：双端荧光标记纳米载体、交联材料、生物分子标记及荧光追踪研究。
