一、试剂参数
中文名称：6-二氟羧基荧光素-N-羟基琥珀酰亚胺酯，6-异构体二氟羧基荧光素-NHS酯，6-FAM-NHS 酯（二氟版）
英文名称：Difluorocarboxyfluorescein NHS Ester, 6-isomer；Difluorocarboxyfluorescein NHS, 6-isomer
CAS：2702251-82-7
分子式： C25H13F2NO9
分子量：509.369
激发波长Ex(nm)：496
发射波长Em(nm)：524
供应商：西安凯新生物科技有限公司
纯度：≥95%
外观：固体
溶解性：易溶于DMSO、DMF等有机溶剂，微溶于水
储存条件：应密封避光，在干燥、低温（如 -20°C）条件下保存，以防止潮解和失活
包装规格：1mg、5mg、10mg
结构式：
二、试剂介绍
该化合物是一种非常重要的荧光标记试剂，其核心应用是基于NHS酯与伯胺基的反应。
特异性反应： NHS酯在弱碱性条件下（pH 7.5-9.0），可以与蛋白质、多肽、氨基修饰的核酸或其他分子上的伯胺基 发生高效的酰胺化反应，形成稳定的酰胺键。
靶点：
蛋白质的N-末端氨基 和赖氨酸侧链的ε-氨基。
工作流程：
将目标分子（如抗体、蛋白质）溶解在含有温和碱性缓冲液中，以确保伯胺基以非质子化的活性形式存在。
将 6-二氟羧基荧光素-NHS酯（通常先溶解在无水DMF或DMSO中）加入到反应体系中。
室温或低温下孵育一段时间，NHS酯会与伯胺基反应，将染料共价连接到目标分子上。
特点与优势：
明亮绿色荧光： 激发/发射波长与FAM相似，是流式细胞术、荧光显微成像等最常用的绿色荧光染料之一。
高反应活性： NHS酯与伯胺的反应非常高效。
靶点丰富： 由于蛋白质表面通常含有多个赖氨酸，因此可以实现高标记率。
6-异构体： 与5-异构体一起，为研究人员提供了选择，有时特定的异构体可能对目标蛋白的活性影响更小。
总结：
6-二氟羧基荧光素-NHS酯 是一种用于特异性标记蛋白质或其他分子上伯胺基的高性能绿色荧光染料。它是制备荧光抗体、探针和生物传感器的关键试剂，尤其适用于需要高光稳定性的FAM通道应用。
简记： 它与“5-异构体”的关系就像是一对非常相似的“双胞胎”，核心功能相同，只是分子结构上荧光团连接的位置略有不同。
Difluorocarboxyfluorescein NHS Ester, 6-isomer, is a fluorescent analogue of fluorescein that reacts with amines. It addresses several limitations of fluorescein, offering enhanced photostability and a lower pKa (~4.7 compared to fluorescein's 6.4), resulting in fluorescence that remains largely pH-insensitive within physiological ranges. Although mixed isomers of difluorocarboxyfluorescein NHS ester are often used as routine fluorescent dyes for labeling proteins, peptides, and nucleotides, purifying peptides and nucleotides labeled with the 5(6) isomer can be challenging due to signal broadening during HPLC purification. Peptides and nucleotides labeled with a single isomer typically show improved resolution in HPLC purification, which is often necessary during conjugation processes.
三、相关试剂
MB 543 DBCO
Difluorocarboxyfluorescein NHS Ester, 5-isomer
MB 594 Alkyne
JOE phosphoramidite, 6-isome
Difluorocarboxyfluorescein Azide, 6-isomer
AMCA LC Acid
MB 594 DBCO
Fmoc Lys(AMCA)-OH
Carboxyrhodamine 110 Alkyne
Carboxyrhodamine 110 LC Acid
IR 680LT Maleimide
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该试剂只用于科研实验，不能用于人体。
