化学名称与结构特征
Cy3.5 NHS ester是一种水溶性荧光染料的活性酯衍生物，属于氨基反应型荧光试剂。其核心结构为 Cyanine 染料家族成员 Cy3.5，具有延长的共轭双键体系，因而在可见光-近红外光区具有较强的吸收与发射特性。通过 NHS（N-羟基琥珀酰亚胺）酯官能团修饰，Cy3.5 可以与含有游离氨基（-NH₂）的分子形成稳定的酰胺键，实现高效共价标记。化学式通常为 C₄₀H₄₂N₃O₇⁺（具体取决于盐形式），分子量约为 685–700 Da。其结构包含亲水的磺酸盐基团，提高水溶性和分散性，使其适合在水性溶液中进行标记。
光学特性
Cy3.5 NHS ester 具有明显的荧光性质：其吸收波长约为 675 nm，发射波长约为 694 nm，发射光谱较宽且强度高，量子产率优良。由于其长波『长发』射，可减少生物样品背景自发荧光干扰，适用于多色荧光成像实验。荧光强度随pH变化略有波动，但在pH 7–8范围内保持稳定。其光稳定性较高，可承受短时间光照，不易发生光漂白。
常用名Cyanine3.5 NHS酯
英文名Cy3.5 NHS ester
CAS号2231670-85-0
分子量654.83
分子式C42H44N3O4+
Cy3.5 NHS ester
化学反应特性
Cy3.5 NHS ester 属于亲电性强的酰基化试剂，能在温和条件下与一级或二级胺发生快速的亲核取代反应生成稳定的酰胺键。反应一般在弱碱性环境（pH 7–9）进行，以保证胺基去质子化，提高反应效率。反应速度快，通常室温下几十分钟至数小时即可完成标记。由于NHS酯对水敏感，在水溶液中容易水解，因此标记反应通常在有机溶剂或缓冲体系（如PBS、碳酸盐缓冲液）中进行，并避免长时间暴露于水环境。
应用范围
Cy3.5 NHS ester 广泛用于各类生化与材料科学实验，主要应用包括：
蛋白质标记：可与蛋白质的赖氨酸残基共价结合，用于荧光检测、定量分析、蛋白质动力学研究和蛋白质相互作用研究。
多肽和核酸修饰：通过氨基修饰的寡核苷酸或多肽进行标记，用于荧光成像、分子追踪和结合研究。
聚合物和材料科学：在功能化聚合物、纳米颗粒或表面修饰材料中作为荧光标记，实现材料可视化追踪与分析。
光谱学与成像：适合用于荧光显微镜🔬、多色荧光成像和荧光共振能量转移（FRET）实验中，尤其在近红外区可降低背景干扰，提高信噪比。
操作与储存注意事项
Cy3.5 NHS ester 对光、热和水分敏感，需要妥善操作与储存：
储存条件：避光、低温（-20℃）干燥条件下保存，避免反复冻融，可在干燥的溶剂或固体状态下长期稳定。
溶解建议：使用无水 DMSO 或 DMF 配制母液，避免直接加入水溶液，减少水解。配制后可分装冷冻保存。
使用注意：在标记过程中，应尽量减少光照，使用缓冲液控制pH在弱碱范围，避免高温或强酸碱环境，确保反应效率和荧光性能。
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