集菌仪（全自动微生物限度检验仪）的工作流程是一个标准化、无菌化的过程，主要用于药品、食品、医疗器械等样品的无菌检查或微生物限度检查。其核心是通过负压抽滤，将样品中的微生物截留在滤膜上，然后进行培养检测。
以下是详细的工作流程，可分为 准备、操作、结束处理 三个阶段：
一、 准备阶段
此阶段至关重要，确保后续操作在无菌条件下进行。
- 环境与仪器准备：
- 在无菌室或超净工作台中进行所有操作。
- 开启集菌仪，进行自检。设置合适的参数（如泵速、过滤时间等）。通常泵速为低速（如50-100 rpm），以防损伤可能存在的微生物。
- 用75%酒精棉球彻底擦拭集菌仪的工作台面、泵头及可能接触的部位。
- 实验材料准备：
- 一次性无菌培养器：检查包装是否完好、在有效期内。通常为三联式（含三个培养瓶）或专用培养器。
- 样品：根据药典或标准准备待检样品。
- 冲洗液：准备足量的无菌稀释液或冲洗液（如0.9%无菌氯化钠溶液、pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液等），用于稀释样品和冲洗滤膜。
- 实验器具：无菌剪刀、无菌注射器💉、酒精灯、灭菌镊子等。
- 培养基：根据检验目的准备相应的培养基（如硫乙醇酸盐流体培养基用于厌氧菌检查，胰酪大豆胨液体培养基用于需氧菌检查）。
- 安装培养器：
- 在无菌条件下，打开一次性培养器的外包装。
- 将培养器的 “进样管” 端牢固插入集菌仪的蠕动泵管卡槽中。
- 将培养器的 “排气端”或“出液管” 放入废液收集容器中。
二、 操作阶段（关键过滤过程）
这是实现样品过滤与微生物截留的核心步骤。
- 润湿与排气：
- 打开蠕动泵，让少量冲洗液通过培养器，以润湿滤膜并排尽管路中的空气。然后关闭泵。
- 样品上样与过滤：
- 液体样品：用无菌注射器💉吸取规定量的样品，直接注入培养器的进样管路或样品杯。
- 非水溶性供试品：先用适当的溶剂（如十四烷酸异丙酯）溶解或稀释后上样。
- 固体样品：需先用无菌稀释液溶解、均质或浸提后，取浸提液上样。
- 启动集菌仪，样品在负压下通过滤膜（通常孔径为0.22µm或0.45µm），微生物被截留在滤膜表面，滤液被收集或排入废液缸。
- 滤膜冲洗：
- 样品过滤完毕后，保持过滤状态，用规定体积和次数的无菌冲洗液多次冲洗滤膜。这一步是为了洗去可能抑制微生物生长的样品残留（如抗生素、防腐剂），确保微生物能在后续培养中正常生长。每次冲洗需完全滤干。
三、 结束处理与培养阶段
此阶段将截留了微生物的滤膜转移到培养基中进行培养。
- 转移/灌注培养基：
- 对于三联集菌培养器：
- 无菌检查：过滤冲洗完成后，在无菌条件下，分别向三个培养瓶内注入规定量的不同培养基（如FTM和TSB）。
- 微生物限度检查：通常灌注一种培养基（如胰酪大豆胨液体培养基）。
- 对于需手动转移滤膜的型号：无菌打开过滤杯，用无菌镊子将滤膜取出，正面朝上贴于琼脂平板表面，或浸入液体培养基中。
- 培养与观察：
- 从集菌仪上取下整个培养单元（或已接种的平板/瓶）。
- 根据规定进行培养：
- 无菌检查：FTM培养基置30-35℃培养14天，TSB培养基置20-25℃培养14天。
- 微生物限度检查：通常置30-35℃培养3-5天。
- 在培养期间定期观察，检查培养基是否出现浑浊（液体培养基）或菌落生长（平板或滤膜），并记录结果。
- 清理与消毒：
- 将废液缸中的废液按生物危害☣️废弃物处理规定进行消毒处理（如浸泡于消毒液中）。
- 使用过的培养器、注射器💉、吸管等一次性物品，经高压灭菌后丢弃。
- 用75%酒精再次擦拭集菌仪表面，保持清洁。
注意事项
- 严格无菌：所有操作必须在A级空气环境下进行，防止外来污染。
- 验证试验：在正式检验前，需进行方法适用性试验，确认样品在所用方法和条件下无抑菌性，或抑菌性已被有效消除。
- 阴性/阳性对照：每次检验应同时进行阴性对照（用稀释液代替样品）和阳性对照（接种已知菌），以确保实验系统有效。
- 泵速控制：过滤粘稠样品时需适当降低泵速，防止滤膜堵塞或微生物受损。
遵循这个标准化流程，可以确保集菌仪检测结果的准确性、可靠性和可重复性。
