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将 N₃-C₅-NHS ester与含有伯氨基的第一个分子（例如：一个蛋白质、一个胺修饰的纳米颗粒或一个带有氨基的靶向配体）反应。也有其他变体，如 N₃-C₂-NHSester（短臂）或 N₃-C₁₂-…