Calcein Red,AM,染色的具体步骤

参数信息

同义名:Calcein Red Acetoxymethyl ester钙黄绿素红乙酰甲酯;

分子量:1015.79

纯度:≥95%(HPLC)

Ex/Em:560/574nm

溶解性:溶于DMSO(1~5mM)

储存条件:-20℃避光干燥

生产厂商:西安强化生物科技

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简单概述

本品是Calcein Red,AM,自身无荧光,具有细胞膜渗透性。

一旦进入细胞后,被细胞内酯酶水解为钙黄绿素红(Calcein Red),能与胞内钙离子结合,产生强烈的红色荧光(Ex/Em=560/574),用标准的TRITC/Cy3滤片设置检测。

染色步骤

大多数实验中Calcein Red AM的工作浓度为2-5μM。

由于不同细胞系的染色条件不同,初次实验建议做梯度实验,以确定Calcein Red AM的工作浓度,使用低探针浓度得到的荧光结果为筛选原则。

(1)取一管适量分装的储存液(1000×)置于室温,至少回温20min,低速离心后,用合适的缓冲液如PBS,HBSS-HEPES稀释到1×染色工作液。

(2)对于贴壁细胞,先用胰酶-EDTA消化细胞,离心收集细胞(1000 rpm,3min)。对于悬浮细胞,直接离心收集细胞。

(3)去上清,用缓冲液清洗细胞2~3次,充分去除残留的酯酶活性。

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(4)用1/10细胞培养基体积的Calcein Red AM染色工作液重悬细胞,37℃孵育20min~1h。

(5)用PBS(或者其他缓冲液)洗涤细胞两次去除多余染料。

(6)用含合适滤光片(Ex/Em= 560nm/574nm)的仪器进行检测。

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以上资料由西安强化生物科技有限公司xxn整理!

本试剂仅适用于科研实验,敬请知悉。

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