快速了解Cy3-OH,Cyanine3 Hydroxyl的功能结构和使用流程!

快速了解Cy3-OH,Cyanine3 Hydroxyl的功能结构和使用流程!
一、物化性质

保存条件:避光、-20°C储存,避免反复冻融

溶解性:可溶于部分有机溶剂(如DMSO、DMF等)

英文名称:Cy3-OH,Cyanine3 Hydroxyl

中文名称:花菁素Cy3-羟基

CAS:400763-55-5

分子式:C29H37N2O2+

分子量:445.63

规格:5mg、10mg、25mg

纯度:95%+

二、功能结构与组成

核心结构:属于花菁染料家族,包含共轭双键体系,末端修饰羟基(-OH)。

羟基功能:

反应活性较低,需活化后与羧基(-COOH)形成酯键,或转化为氨基(-NH2)等活性基团。

可通过化学修饰实现与生物分子的共价偶联。

光谱与荧光性质

吸收/发射波长:

(吸收):550 nm。

(发射):565–570 nm。

光学参数:

摩尔消光系数:高达15.0×10⁵ M⁻¹cm⁻¹。

荧光量子产率:0.15–0.30。

光稳定性:优于传统染料,引入羟基后抗光漂白能力提升。

环境敏感性:

pH依赖性:荧光强度可能随pH变化。

溶剂相容性:溶于DMF、DMSO、甲醇等有机溶剂,微溶于水。

三、标准操作流程(以抗体标记为例)

(一)实验准备

试剂配制:

将Cy3-OH溶解于无水DMF中,配制成10 mM储备液。

标记缓冲液:0.1 M碳酸氢钠缓冲液(pH 8.5)或PBS(pH 7.4)。

生物分子处理:

抗体/蛋白需浓缩至≥1 mg/mL,超滤离心去除杂质。

(二)标记步骤

活化Cy3-OH(关键步骤):

取10 mM Cy3-OH/DMF溶液,加入EDC和NHS,室温避光反应30分钟。

偶联反应:

将活化的Cy3-酯滴加至抗体溶液中。

37℃避光振荡反应1-2小时。

纯化与终止:

加入1 M Tris-HCl(pH 8.0)终止反应(终浓度50 mM)。

超滤离心(12,000×g,10分钟)去除游离染料,用PBS洗涤3次。

产物定量:

紫外-可见光谱检测:Cy3特征吸收峰(555 nm)计算标记效率。

注:若标记核酸(如DNA探针),需先将Cy3-OH转化为氨基衍生物,再与修饰的核酸反应。

四、关联试剂

AF 700 WGA

AF 633 WGA

Cy5.5 WGA

Cy7 WGA

PerCP-WGA

Rhodamine 110 Chloride

Tetramethylrhodamine WGA

四甲基罗丹明小麦胚芽凝集素

辣根过氧化物酶标记的番茄凝集素

CF 680 LEL;CF 680标记的番茄凝集素

BC Maleimide;BC Mal;BC马来酰亚胺

Dy510-XL acid;811785-95-2;Dy510-XL羧酸

HRP CTB;辣根过氧化物酶标记的霍乱毒素 B 亚基

HRP LEL;Horseradish Peroxidase Tomato lectin

195136-52-8;OG488 COOH;OG488 acid;OG488 羧酸

DY520XL-tyramide.TEA;DY520XL-TSA.TEA;DY520XL tyramide triethylamine salt

(本文内容由陕西新研博美生物科技有限公司木南整理)

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