Sulfo-Cy5.5-E 琥珀酰亚胺酯，简称 Sulfo-Cy5.5 NHS Ester，是一种常用的近红外荧光染料活性酯衍生物，属于Cyanine类染料家族，具有较高的水溶性和优异的光学性能。其分子结构核心为Cyanine-5.5染料骨架，通过在染料结构上引入磺酸基（-SO₃H），大大提高了染料在水溶液中的溶解度，使其适用于生物体系中的标记和检测。其分子末端带有活泼的NHS酯基团（琥珀酰亚胺酯），可与生物分子中的伯胺基团（例如蛋白质、肽、寡核苷酸、抗体、表面修饰材料等）快速发生共价偶联，形成稳定的酰胺键，从而实现对靶分子的荧光标记。
Sulfo-Cy5.5-E NHS酯的激发光波长（λ_ex）通常位于 675 nm 左右，发射光波长（λ_em）则在 694 nm 左右，属于近红外区域。这使其在荧光成像中具有低背景干扰、组织自发荧光少、穿透能力强等显著优势，特别适合活体成像（in vivo imaging）、组织深层探测以及需要低本底噪声的敏感检测。其荧光量子产率较高，发光强度稳定，在多数生物实验体系中表现出优异的信噪比。
Sulfo-Cy5.5-E NHS酯因其 疏水性较小、带负电荷，更易在水溶液中操作，不易发生聚集或沉淀，方便了与生物分子的偶联反应。此外，磺酸基的引入还改善了染料与非特异性靶标间的结合，降低背景噪声。这些特性使Sulfo-Cy5.5-E NHS酯成为免疫组化（IHC）、荧光原位杂交（FISH）、流式细胞术（Flow Cytometry）、蛋白『芯片』、核酸探针标记、靶向药物递送示踪、近红外荧光活体成像等多种实验中理想的荧光标记工具。
在偶联反应方面，Sulfo-Cy5.5-E NHS酯最适合在 pH 7.2～9.0 条件下与伯胺基团反应，常见的反应缓冲液如碳酸氢盐缓冲液（NaHCO₃）、HEPES、PBS（无胺形式）等。反应通常在室温或略低温度下进行，约需 30 分钟至 2 小时，即可获得较高的标记效率。反应完成后，常通过透析、凝胶过滤层析或超滤等方法去除多余的游离染料。
在存储上，Sulfo-Cy5.5-E NHS酯对水汽较敏感，易水解失活，通常应储存在低温（-20°C或更低）、避光、干燥的环境中，并尽量在使用当天现配溶液。若需溶解，一般推荐使用无水DMSO或DMF，并尽快完成标记实验，以保证偶联效率。
Sulfo-Cy5.5-E NHS酯的另一个显著优点是其良好的生物相容性。因为近红外区域与生物组织的吸收峰较少，因此荧光信号在体内传播距离较远，信号衰减较小，能有效降低生物组织本身的自发荧光干扰。此外，Cyanine类染料通常具有较低的光漂白速率，尤其是引入磺酸基团的衍生物，如Sulfo-Cy5.5，耐光性更佳，适合需要长时间曝光或重复扫描的实验。
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QY小编zyl分享2025.7.11
