为什么原代细胞的过表达和敲除更加建议用慢病毒进行转导，而不是脂质体转染？
病毒转导是利用病毒天生的感染能力，对难转染的的神经细胞可以轻松应对，还能实现基因的稳定表达，但是慢病毒的生产周期较长，还会面临病毒低度低，等问题对实验操作者要求高。
1.原代细胞的膜结构与内吞能力弱
脂质体转染的核心机制是形成带正电的脂质体/DNA🧬复合物，通过与带负电的细胞膜相互作用，主要通过内吞作用进入细胞。原代细胞的细胞膜结构敏感，对这种复合物的内吞效率通常远低于细胞系。
慢病毒利用其包膜蛋白（如VSV-G）与细胞表面的特异性受体高效结合，启动病毒包膜与细胞膜的融合或内吞途径，转导效率可达70%-90%，尤其适合难转染的细胞。
2.细胞毒性问题
阳离子脂质体/聚合物试剂对细胞膜有干扰作用，会产生细胞毒性。这种毒性在自我修复能力强的细胞系中可能尚可耐受，但对脆弱的原代细胞往往是致命的，导致大量细胞死亡，严重降低实验效率和可靠性。
慢病毒载体（特别是经过优化的第三代、四代系统）本身的细胞毒性相对较低。虽然高MOI（感染复数）或某些特定病毒制备批次也可能有毒性，但通过精确滴定病毒滴度并优化MOI，可以在保证较高转导效率的同时，将细胞毒性控制在可接受范围内，维持较好的细胞存活率。
3.增殖缓慢
脂质体转染依赖细胞分裂的活跃期，原代细胞通常分裂非常缓慢或不分裂（处于G0期），因此脂质体转染几乎无法实现有效的基因组整合和长期稳定表达，即使瞬时表达效率也可能很低。
慢病毒是逆转录病毒，其基因组是RNA，进入细胞后，在细胞质中会被逆转录成cDNA🧬，主动转运穿过完整的核孔复合体进入非分裂细胞的细胞核，然后，在整合酶的作用下，以相对较高的效率稳定地整合到宿主基因组中。这使得慢病毒能高效感染并稳定整合入分裂和非分裂细胞。
