避坑指南:ATTO 620 NHS Ester的关键问题与解决方案(避坑指南大全)

避坑指南:ATTO 620 NHS Ester的关键问题与解决方案(避坑指南大全)
一、物化性质

保存条件:避光、-20°C储存,避免反复冻融

溶解性:溶于水以及部分有机溶液。

英文名称:ATTO 620 NHS Ester

中文名称:ATTO 620 活性酯

激发波长:620nm

发射波长:642nm

分子量:609

规格:5mg,10mg,25mg

纯度:95%+

二、功能结构与组成

ATTO 620 NHS Ester是一种深红色荧光染料,其核心为ATTO 620发色团,修饰有N-羟基琥珀酰亚胺酯(NHS ester)活性基团。

该基团可与含伯胺的分子形成稳定的酰胺键,实现共价标记。

稳定性优势

光稳定性:抗光漂白能力强,适用于长时间成像 。

pH稳定性:在pH 2–11范围内荧光性质稳定,适应不同实验环境 。

温度依赖性:荧光强度随温度变化,可用于活细胞温度映射及反应动力学监测 。

三、关键问题与解决方案

问题一:标记效率低

原因:

缓冲液含胺杂质消耗染料。

NHS酯水解。

pH不当。

解决:

使用无胺缓冲液。

控制反应时间≤60分钟,现配染料母液。

优化pH至8.5±0.5。

问题二:荧光信号弱

原因:

光漂白。

重金属离子(如银纳米粒子)或ROS导致猝灭。

染料聚集(ACQ效应)。

解决:

添加抗氧化剂(如1 mM抗坏血酸)。

优化DOS避免过标记。

问题三:纯化后背景高

原因:游离染料残留或蛋白聚集。

解决:

增加层析柱体积或延长透析时间。

标记前离心蛋白去除聚集体。

四、关联试剂

AF 488 TFP ester

Rhodamine 123

Alkynyl Stearic Acid

Alkynyl Myristic Acid

Alexa Fluor430 alkyne

Alexa Fluor 647 alkyne

Dihydrorhodamine 123

AF594 Ethyl NHS Ester

BC Maleimide;BC Mal

Rhodamine 110 Chloride

CF568 conijugated-rCTB

Alexa Fluor488 TFP ester

Alexa Fluor 555 maleimide

4-Diethylamino-piperidine

BODIPY aminoacetaldehyde

Cyanine2 NHS Ester,Cy2活性酯

(本文内容由陕西新研博美生物科技有限公司木南整理)

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