Cyanine2-HSA 是一种由荧光染料 Cyanine2（又称 Cy2）与人血清白蛋白（HSA, Human Serum Albumin）共价偶联形成的荧光标记蛋白复合物，具有良好的水溶性、生物相容性和成像能力。
一、Cyanine2 染料简介
Cyanine2（Cy2）是一种绿色荧光的阳离子型氰ine类染料，结构中通常含有两个苯并噻唑或吡啶环，通过多键连接形成共轭体系。其关键光学参数如下：
激发波长（λex）：约 488 nm
发射波长（λem）：约 510–520 nm
量子产率：较高，荧光亮度强
光稳定性：中等偏高，适用于荧光显微镜和流式细胞术
Cyanine2 的结构可通过NHS酯、马来酰亚胺等活性基团进行修饰，便于与蛋白质或小分子共价偶联。
二、HSA（人血清白蛋白）简介
HSA 是人血液中含量最丰富的蛋白质，分子量约为 66.5 kDa，由585个氨基酸残基组成，结构稳定，具备多种配体结合位点。HSA 具有以下生物特性：
高生物相容性与稳定性
可作为药物/探针递送载体
长循环半衰期（约19天）
可被肿瘤组织优先摄取（EPR效应）
这些特性使 HSA 成为理想的荧光探针载体或靶向递送平台。
三、Cyanine2-HSA 的构建方法
Cyanine2-HSA 通常通过共价偶联法合成，步骤如下：
激活染料：使用 Cyanine2-NHS（或其他活性酯）形式，使其能够与蛋白质中的赖氨酸残基发生酰胺键形成反应。
反应条件：在缓冲体系（如PBS, pH 7.4–8.5）中将Cy2染料与HSA混合孵育数小时。
纯化：通过透析或凝胶层析（如Sephadex G-25）去除未反应的游离染料。
鉴定：通过UV-Vis吸收光谱和荧光光谱确认标记成功；可计算结合比（即Cy2/HSA的摩尔比）。
最终产物应保留HSA的构象稳定性和Cy2的荧光特性。
四、光学与生物性质
荧光性能：Cy2-HSA 的激发和发射波长适合常见激光设备（如488 nm），可用于共聚焦、流式、成像分析。
稳定性：在生理环境中具有较高光稳定性和化学稳定性。
生物相容性：由于使用的是天然蛋白，免疫原性低，可在细胞和动物体内应用。
此外，HSA部分仍保留其天然的药物结合位点，可用于进一步的功能化修饰。
五、应用领域
活细胞和组织成像
Cy2-HSA 可用于标记细胞或组织，实现绿色荧光成像，观察细胞摄取、分布和运输过程。由于HSA的血浆蛋白性质，它易被内吞入细胞，特别是肿瘤细胞。
药物递送示踪
HSA 可作为多种药物的载体，而 Cyanine2 则可提供可视化标记功能，实现“可示踪药物”的设计。
免疫分析与ELISA
Cyanine2-HSA 可作为荧光标记抗原，在酶联免疫分析、斑点实验等中用于信号放大和定量分析。
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