CD8 分子是免疫系统中至关重要的细胞表面糖蛋白，属于免疫球蛋白超家族成员，主要作为 T 细胞受体（TCR）的共受体，在大鼠适应性免疫应答中发挥关键作用，是识别细胞毒性 T 淋巴细胞（CTL）及相关免疫细胞群体的核心标志物，同时也是评估机体细胞免疫功能状态、诊断免疫相关疾病及研发免疫调控药物的重要检测指标。
从分子基础来看，大鼠 CD8 分子的编码基因分别位于不同染色体，其表达受免疫细胞分化相关转录因子（如 TCF-1、Runx3 等）的严格调控，确保仅在特定免疫细胞发育阶段启动表达。在正常生理状态下，CD8 分子主要以异二聚体形式存在，由 CD8α 和 CD8β 两条链通过二硫键连接形成，其中 CD8α 链可单独表达于部分自然杀伤细胞（NK 细胞）、树突状细胞及胸腺细胞表面，而功能性的 CD8 分子通常以 αβ 异二聚体形式存在于成熟的细胞毒性 T 淋巴细胞表面。此外，在胸腺发育过程中，双阳性胸腺细胞（CD4+CD8+）也会表达 CD8 分子，随着细胞分化成熟，逐渐向单阳性细胞（CD4 - CD8 + 或 CD4+CD8 -）转变，CD8 分子的表达状态成为判断 T 细胞发育阶段的重要依据。
在病理条件下，CD8 分子的表达水平与多种疾病的发生发展密切相关，具有重要的临床检测价值。在感染性疾病中，如病毒（流感病毒、乙肝病毒等）、细菌感染时，机体为清除病原体，会激活并增殖细胞毒性 T 淋巴细胞，此时外周血中 CD8 阳性 T 细胞的数量及 CD8 分子的表达水平会显著升高，其变化趋势可反映机体细胞免疫应答的强度和病原体清除效率，为疾病诊断和治疗效果评估提供依据；在肿瘤疾病中，肿瘤浸润性 CD8 阳性 T 细胞的数量和功能状态与肿瘤预后密切相关，高数量的活化 CD8 阳性 T 细胞通常提示更强的肿瘤杀伤能力和更优的患者预后，而肿瘤微环境中的免疫抑制因素可能导致 CD8 分子表达下调或 CD8 阳性 T 细胞功能耗竭，因此检测 CD8 分子的表达可辅助评估肿瘤免疫微环境状态及免疫治疗疗效；在自身免疫性疾病（如多发性硬化症、1 型糖尿病）中，异常活化的 CD8 阳性 T 细胞会攻击自身组织细胞，此时 CD8 分子的表达异常可能参与疾病的发病过程，其表达水平可作为评估疾病活动度的潜在指标；在免疫缺陷疾病中，如先天性免疫缺陷或获得性免疫缺陷（如类似大鼠免疫缺陷模型），CD8 阳性 T 细胞数量减少或 CD8 分子表达缺陷会导致机体细胞免疫功能低下，易发生反复感染，检测 CD8 分子含量可明确免疫缺陷程度。基于此，精准检测大鼠体内 CD8 分子的含量，对于解析细胞免疫调控机制、探究免疫相关疾病发病机理及开发免疫治疗药物具有重要意义，而大鼠 CD8 分子 (CD8) ELISA 试剂盒则为实现这一目标提供了高效、特异的技术支撑。
大鼠 CD8 分子是由 α 链和 β 链组成的跨膜糖蛋白，可形成 αα 同源二聚体或 αβ 异二聚体，其中 αβ 异二聚体是发挥生理功能的主要形式，两种形式的分子结构均具有典型的免疫球蛋白超家族特征，且糖基化修饰对其结构稳定性和功能发挥至关重要。
CD8α 链成熟蛋白由约 235 个氨基酸残基组成，相对分子质量约为 32-34 kDa，分子结构包括胞外免疫球蛋白 V 型（IgV）结构域、铰链区、跨膜结构域和胞内结构域四部分。胞外 IgV 结构域是 CD8α 链的核心功能区域，含有两个保守的半胱氨酸残基，可形成一个二硫键，维系 IgV 结构域的空间构象，该区域表面分布着与主要组织相容性复合体（MHC）Ⅰ 类分子 α3 结构域结合的关键位点，同时也是抗体识别的主要抗原表位区域；铰链区富含脯氨酸残基，具有一定的柔韧性，可调节胞外结构域与细胞膜之间的距离，便于与 MHCⅠ 类分子结合；跨膜结构域由约 25 个疏水氨基酸残基组成，形成 α- 螺旋结构，镶嵌于细胞膜脂质双分子层中，起到锚定分子的作用；胞内结构域较短，由约 25 个氨基酸残基组成，含有一个保守的酪氨酸磷酸化位点（YXXL motif），该位点在 CD8 分子介导的信号转导过程中发挥关键作用，磷酸化后可与细胞内的信号分子（如 Lck 酪氨酸激酶）结合，启动下游信号通路。
CD8β 链成熟蛋白由约 214 个氨基酸残基组成，相对分子质量约为 37-39 kDa，其结构与 CD8α 链类似，同样包含胞外 IgV 结构域、铰链区、跨膜结构域和胞内结构域，但各结构域的氨基酸序列和功能存在差异。胞外 IgV 结构域虽也能与 MHCⅠ 类分子结合，但亲和力低于 CD8α 链，其主要作用是增强 αβ 异二聚体与 MHCⅠ 类分子结合的特异性和稳定性；铰链区含有较多的糖基化位点，糖链修饰可影响 CD8 分子的细胞定位和功能；跨膜结构域含有特定的氨基酸序列，可与 T 细胞受体复合物中的 CD3 分子相互作用，辅助信号传递；胞内结构域含有多个丝氨酸 / 苏氨酸磷酸化位点，可能参与 CD8 分子的内化与降解调控，调节细胞表面 CD8 分子的表达水平。
在大鼠体内，CD8 分子的分布具有明确的组织和细胞特异性，主要集中在与细胞免疫应答密切相关的组织和免疫细胞表面，且其表达状态与细胞的分化成熟度及功能特性紧密相关。
在组织水平上，CD8 分子主要分布于免疫器官和免疫应答活跃的组织中。在中枢免疫器官胸腺中，CD8 分子的表达呈现动态变化：早期胸腺细胞（双阴性细胞，CD4 - CD8 -）不表达 CD8 分子，随着细胞分化进入双阳性阶段（CD4+CD8+），开始同时表达 CD8α 和 CD8β 链，最终分化为成熟的单阳性细胞毒性 T 淋巴细胞（CD4 - CD8+）后，稳定表达 CD8αβ 异二聚体，胸腺髓质区域是成熟 CD8 阳性 T 细胞的主要分布部位；在周围免疫器官中，脾、淋巴结、扁桃体等组织的特定免疫区域富含 CD8 阳性 T 细胞，其中脾的白髓动脉周围淋巴鞘、淋巴结的副皮质区是 CD8 阳性 T 细胞的主要聚集区域，这些细胞在接受抗原刺激后可迅速活化，参与特异性细胞免疫应答；此外，在黏膜相关淋巴组织（如肠道派氏结、呼吸道黏膜淋巴组织）中，也存在一定数量的 CD8 阳性 T 细胞（如黏膜上皮内淋巴细胞中的 CD8 阳性 T 细胞），参与黏膜免疫防御。在病理状态下，如感染或肿瘤组织中，CD8 阳性 T 细胞会迁移至病变部位并聚集，通过表达 CD8 分子增强对靶细胞的识别和杀伤能力。
在细胞水平上，CD8 分子的表达与细胞类型及功能密切相关。成熟的细胞毒性 T 淋巴细胞（CTL）是 CD8 分子的主要表达细胞，其表面的 CD8αβ 异二聚体与 TCR 协同作用，特异性识别靶细胞表面的 MHCⅠ 类分子 - 抗原肽复合物，启动细胞毒性效应，清除病原体感染细胞或肿瘤细胞；部分自然杀伤细胞（NK 细胞）表面可表达 CD8αα 同源二聚体，该形式的 CD8 分子可能参与 NK 细胞对靶细胞的识别和杀伤调控，但功能机制与 CD8αβ 异二聚体存在差异；在树突状细胞中，部分未成熟树突状细胞及特定亚型的成熟树突状细胞表面可低表达 CD8α 链，参与抗原提呈及免疫细胞间的相互作用；在胸腺发育过程中的胸腺细胞，其 CD8 分子的表达状态是判断细胞分化阶段的关键标志，从双阴性细胞到双阳性细胞再到单阳性细胞，CD8 分子的表达伴随细胞分化逐渐调整；此外，少数活化的 γδT 细胞也可能表达 CD8 分子，但其表达水平和功能意义尚未完全明确，推测可能参与特定类型的免疫应答。
生理功能
CD8 分子作为 T 细胞受体的共受体及免疫细胞表面标志物，在大鼠免疫系统中发挥多方面关键生理功能，涵盖细胞免疫应答的启动、靶细胞杀伤、免疫细胞发育分化及免疫耐受维持等，是保障机体细胞免疫功能正常运行的重要分子。
（一）增强 TCR 介导的抗原识别与信号转导
CD8 分子最核心的生理功能是作为 T 细胞受体的共受体，增强细胞毒性 T 淋巴细胞对靶细胞表面 MHCⅠ 类分子 - 抗原肽复合物的识别特异性和亲和力，并辅助传递活化信号。当细胞毒性 T 淋巴细胞与靶细胞接触时，CD8 分子的胞外 IgV 结构域首先与靶细胞表面 MHCⅠ 类分子的 α3 结构域特异性结合，这种结合可使 TCR 与 MHCⅠ 类分子 - 抗原肽复合物的相互作用更稳定，降低 TCR 识别抗原所需的阈值，确保细胞毒性 T 淋巴细胞仅对表达特定抗原的靶细胞产生应答。同时，CD8 分子的胞内结构域可与细胞内的 Lck 酪氨酸激酶结合，Lck 激酶被激活后可磷酸化 TCR 复合物中的 CD3 分子链及 ζ 链上的免疫受体酪氨酸活化基序（ITAMs），进而激活下游信号分子（如 ZAP-70、PLC-γ 等），启动 MAPK、PI3K/Akt 等信号通路，最终导致细胞毒性 T 淋巴细胞活化、增殖并分化为效应细胞，启动对靶细胞的杀伤过程。若 CD8 分子功能缺失或表达异常，细胞毒性 T 淋巴细胞对靶细胞的抗原识别能力会显著下降，无法有效启动活化信号，导致细胞免疫应答功能受损。
（二）介导细胞毒性 T 淋巴细胞对靶细胞的杀伤作用
CD8 分子在细胞毒性 T 淋巴细胞杀伤靶细胞的过程中发挥关键调控作用，确保杀伤过程的特异性和高效性。活化后的效应性细胞毒性 T 淋巴细胞通过表面 CD8 分子与靶细胞 MHCⅠ 类分子的特异性结合，维持与靶细胞的稳定接触，为后续杀伤分子的释放及信号传递创造条件。一方面，细胞毒性 T 淋巴细胞可通过颗粒释放途径杀伤靶细胞：在 CD8 分子与 MHCⅠ 类分子结合的介导下，细胞毒性 T 淋巴细胞内的溶细胞颗粒（含有穿孔素、颗粒酶等）向靶细胞方向移动并释放，穿孔素可在靶细胞膜上形成孔道，使颗粒酶进入靶细胞内，激活胱天蛋白酶家族成员，诱导靶细胞凋亡；另一方面，细胞毒性 T 淋巴细胞可通过死亡受体途径杀伤靶细胞：CD8 分子介导的细胞接触可促进细胞毒性 T 淋巴细胞表面的 Fas 配体（FasL）与靶细胞表面的 Fas 受体结合，或释放肿瘤坏死因子（TNF）与靶细胞表面的 TNF 受体结合，激活靶细胞内的凋亡信号通路，导致靶细胞死亡。在这一过程中，CD8 分子不仅确保细胞毒性 T 淋巴细胞仅对表达特定抗原的靶细胞（如病毒感染细胞、肿瘤细胞）产生杀伤作用，避免对正常细胞造成损伤，还能增强杀伤效率，快速清除体内异常靶细胞，维持机体健康。
（三）参与免疫细胞的发育与分化
CD8 分子在大鼠免疫细胞（尤其是 T 细胞）的发育分化过程中发挥重要调控作用，是胸腺细胞分化成熟的关键分子标志和调控因子。在胸腺发育中，双阴性胸腺细胞（CD4 - CD8 -）首先分化为双阳性胸腺细胞（CD4+CD8+），此时 CD8 分子开始表达并参与胸腺细胞的阳性选择过程：双阳性胸腺细胞表面的 TCR 与胸腺皮质上皮细胞表面的 MHCⅠ 类分子 - 自身肽复合物结合，同时 CD8 分子与 MHCⅠ 类分子结合，这种双重结合信号可使胸腺细胞存活并进一步分化，而无法与 MHC 分子结合或结合亲和力过低的胸腺细胞会发生凋亡。经过阳性选择后，双阳性胸腺细胞逐渐失去 CD4 或 CD8 分子的表达，分化为单阳性胸腺细胞（CD4 - CD8 + 或 CD4+CD8 -），其中 CD4 - CD8 + 单阳性细胞即为成熟的细胞毒性 T 淋巴细胞前体，随后迁移至胸腺髓质进行阴性选择，最终发育为具有免疫活性且无自身反应性的成熟细胞毒性 T 淋巴细胞。若 CD8 分子表达异常，胸腺细胞的阳性选择过程会受阻，无法正常分化为成熟的细胞毒性 T 淋巴细胞，导致机体细胞免疫功能缺陷。
（四）维持免疫耐受与免疫平衡
CD8 分子在大鼠机体免疫耐受的形成与维持中也发挥重要作用，可通过调控细胞毒性 T 淋巴细胞的活性及参与调节性 T 细胞的功能，避免免疫应答过度激活或对自身组织产生攻击。在中枢免疫耐受形成过程中，胸腺内的单阳性 CD8 + 胸腺细胞若其 TCR 与胸腺髓质上皮细胞或树突状细胞表面的 MHCⅠ 类分子 - 自身抗原肽复合物具有高亲和力结合，且 CD8 分子辅助传递信号，会导致该胸腺细胞发生凋亡，即阴性选择过程，从而清除具有自身反应性的 CD8 阳性 T 细胞克隆，防止其进入外周免疫系统引发自身免疫疾病。在外周免疫耐受中，部分 CD8 阳性调节性 T 细胞可通过表达 CD8 分子与靶细胞或其他免疫细胞相互作用，分泌 IL-10、TGF-β 等抗炎细胞因子，抑制效应性免疫细胞的活化与增殖，调节免疫应答强度，避免免疫炎症反应过度损伤自身组织。此外，CD8 分子还可通过调控细胞毒性 T 淋巴细胞的活化阈值，确保其仅对病原体感染细胞、肿瘤细胞等异常靶细胞产生应答，而对正常组织细胞无反应，进一步维持机体免疫平衡。
检测原理
大鼠 CD8 分子 (CD8) ELISA 试剂盒基于酶联免疫吸附试验（ELISA）的双抗体夹心法原理，利用特异性抗体与抗原的免疫反应，实现对大鼠样本（血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清液等）中 CD8 分子的精准定量检测，具有特异性强、灵敏度高、操作简便、重复性好等优势，广泛应用于大鼠细胞免疫功能评估、免疫相关疾病研究及药物研发等领域。
该试剂盒的核心组成包括：预包被大鼠 CD8 分子特异性单克隆抗体（捕获抗体，可针对 CD8α 链或 CD8β 链，或同时识别 αβ 异二聚体）的 96 孔酶标板、大鼠 CD8 分子标准品（用于绘制标准曲线，通常为重组大鼠 CD8 蛋白）、辣根过氧化物酶（HRP）标记的大鼠 CD8 分子特异性单克隆抗体（检测抗体，与捕获抗体识别 CD8 分子的不同抗原表位）、TMB 底物溶液（显色剂）、终止液（2M H₂SO₄）及洗涤液（含吐温 - 20 的磷酸盐缓冲液，用于去除未结合成分）。
具体检测流程及原理如下：第一步，样本与标准品的孵育结合。将待检测的大鼠样本（需提前按照试剂盒说明书进行适当稀释处理）和梯度浓度（如 0、31.25、62.5、125、250、500、1000 pg/mL）的大鼠 CD8 分子标准品分别加入到预包被捕获抗体的酶标板孔中，在 37℃恒温条件下孵育 1-2 小时。此过程中，样本或标准品中的 CD8 分子会与酶标板孔壁上的捕获抗体通过抗原 - 抗体特异性结合，形成 “捕获抗体 - CD8 分子” 复合物，而样本中的其他杂质成分则游离于孔内液体中，不与捕获抗体结合。
第二步，洗涤去除游离杂质。孵育结束后，使用试剂盒配套的洗涤液反复洗涤酶标板孔 3-5 次，每次洗涤后需将孔内液体彻底吸干。这一步骤可有效清除孔内未与捕获抗体结合的 CD8 分子及其他杂质成分，最大程度降低非特异性结合对检测结果的干扰，确保后续反应仅针对已形成的 “捕获抗体 - CD8 分子” 复合物进行。
第三步，检测抗体的孵育结合。向洗涤后的各酶标板孔中加入 HRP 标记的检测抗体，再次置于 37℃环境下孵育 1 小时。由于检测抗体与捕获抗体识别 CD8 分子的不同抗原表位，检测抗体会特异性结合到 “捕获抗体 - CD8 分子” 复合物中的 CD8 分子上，形成 “捕获抗体 - CD8 分子 - HRP 标记检测抗体” 的双抗体夹心结构。此时，HRP 酶通过检测抗体被固定在酶标板孔壁上，且 HRP 酶的固定量与样本中 CD8 分子的含量呈严格正相关关系，即样本中 CD8 分子含量越高，孔壁上固定的 HRP 酶量越多。
第四步，二次洗涤与底物显色。检测抗体孵育完成后，再次使用洗涤液洗涤酶标板孔 3-5 次，彻底去除未与 CD8 分子结合的游离 HRP 标记检测抗体，避免其对后续显色反应产生干扰。洗涤结束后，向各酶标板孔中加入 TMB 底物溶液，在 37℃避光条件下孵育 15-30 分钟（具体孵育时间需根据试剂盒说明书调整，避免显色过度或不足）。
