大鼠(Rat)丙二醛(MDA)ELISA检测试剂盒
产品货号:DM-D9692
产品规格:48/96T
大鼠丙二醛(MDA)ELISA 多采用竞争法,用于血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清等氧化应激评估;常见检测范围约 0.3–20 nmol/mL(或 7.8–500 ng/mL),灵敏度低至约 0.1–4.7 ng/mL;批内 / 批间 CV 常 < 10%/<15%。
方法学与适用
原理:竞争 ELISA(包被 MDA 抗原 + 生物素化抗 - MDA 抗体 + HRP - 链霉亲和素,TMB 显色,OD450 与 MDA 浓度呈反比)。
适用:大鼠样本中内源性 MDA 定量;仅供科研。
样本类型与处理
血清 / 血浆:2–8℃ 1000×g 离心 15–20 分钟;避免溶血与高血脂;EDTA / 肝素 / 柠檬酸钠可用,优先 EDTA-Na2/K2。
组织匀浆:预冷 PBS 清洗,1:9 w/v 匀浆,超声破碎,5000×g 5–10 分钟取上清。
细胞培养上清:4℃ 1000×g 20 分钟取上清。
保存:短期 4℃,长期 -20℃/-80℃ 分装;避免反复冻融。
注意:NaN3 抑制 HRP,勿用;含高内源过氧化物酶组织(肝 / 肾 / 胰腺)可先 1% H2O2 室温 15 分钟灭活以降背景。
试剂盒组成(通用)
预包被板(96 孔,可拆卸条)。
冻干 / 液体标准品与稀释液。
生物素化抗 - MDA 抗体(浓缩,需稀释)。
HRP - 链霉亲和素(浓缩,需稀释)。
样本 / 抗体 / 酶稀释液、洗涤液(多为 20×/25×,现用现配)。
TMB 显色液 A/B、终止液(硫酸)。
封板膜、说明书。
操作流程(通用)
试剂与样本室温平衡;稀释洗涤液与工作液。
标准品与样本各 50 μL / 孔,37℃ 孵育 30–60 分钟。
洗板 3–5 次;加生物素化抗体工作液,37℃ 30–60 分钟。
洗板后加 HRP - 链霉亲和素工作液,37℃ 30–60 分钟。
洗板后加 TMB,37℃ 避光显色 10–15 分钟;加终止液转黄。
450 nm 读数(可设 630 nm 校正),由标准曲线计算浓度(浓度与 OD 呈反比)。
性能指标(区间示例)
检测范围:0.312–20 nmol/mL;或 7.813–500 ng/mL。
灵敏度:约 0.1 nmol/mL;或 4.688 ng/mL。
精密度:批内 CV <10%,批间 CV <10–15%。
回收率:常见血清 / 血浆加标回收率 85%–115%(依试剂盒)。
特异性:对大鼠 MDA 特异性良好,与类似物无明显交叉。
稀释线性:梯度稀释样本回收率在合理区间。
选购与实验建议
明确单位:nmol/mL 或 ng/mL,换算系数约 1 nmol/mL ≈ 72 ng/mL(MDA MW ≈ 72 g/mol)。
依据样本类型与预期浓度选择检测范围匹配的试剂盒;优先关注线性、精密度、回收率与稀释线性。
实验设置:每板做标准曲线与复孔;先预实验确认稀释倍数;避免使用叠氮钠;显色后 15 分钟内读数。