Hepa 1-6肝癌小鼠『肿瘤』抗原特异性T细胞含量检测刺激试剂盒说明书-[爱必信absin]

货号： abs57019

产品说明

『肿瘤』抗原特异性T细胞是杀伤癌细胞的主力，由于癌细胞和『肿瘤』抗原的高度异质性，癌细胞没有一种或多种占主导的抗原，因此也就没有几种占主导的抗原特异性T细胞，而传统的使用几种多肽抗原或MHC四聚体技术等检测『肿瘤』抗原特异性T细胞时只能检测针对几种已知特定抗原的抗原特异性T细胞。

本产品检测纳米颗粒负载癌细胞的全细胞抗原，抗原种类全面、多样和广谱，可全面准确检测不同组织中的『肿瘤』抗原特异性T细胞。具有特异性高，准确性高，所检测『肿瘤』抗原特异性T细胞种类全面等优点。

检测样本：

1、小鼠外周血免疫细胞中的『肿瘤』抗原特异性T细胞的含量；

2、小鼠脾细胞中的『肿瘤』抗原特异性T细胞的含量；

3、小鼠淋巴结细胞中的『肿瘤』抗原特异性T细胞的含量；

4、小鼠『肿瘤』组织细胞中的『肿瘤』抗原特异性T细胞的含量；

产品组成

组分20T100T纳米颗粒20mg100mgPBS2ml10ml

使用方法和检测步骤：

1、在细胞培养皿或细胞培养板各孔中加入待检测细胞和相应的培养基，细胞浓度0.8×106-5×106个细胞/mL, 考虑到细胞损失和流式细胞术检测的准确性，建议至少使用100万个细胞以上，建议使用12孔或24孔板培养，至少使用1-2mL以上培养基。

2、向其中加入使用PBS或相应培养基重悬后的纳米粒子。（本检测试剂盒中检测纳米粒子使用终浓度为0.5mg/mL-1.0mg/mL）

3、纳米粒子与待检测细胞共孵育32-48h。

4、在培养基中加入Brefeldin A Solution (BFA) (1000 × 稀释到细胞培养基中)，共孵育4h。

5、使用移液器吹打收集培养基中的悬浮细胞，收集完细胞后将样品细胞在400-500g离心5min，弃去上清液后收集细胞。

6、收集完细胞后将样品细胞重悬于 1 mL PBS 中。

7、除空白对照之外，每个样品加入2μL活死细胞染料标记活细胞和死细胞，混合均匀，冰上避光孵育15-30 min 。

8、孵育完毕后，400-500g离心5 min ，用100 μL FACS buffer 重悬细胞。

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9、除空白对照之外。每个样品中加 2μL Fc Block封闭免疫细胞表面的Fc受体，混匀后冰上孵育5 min。

10、孵育完毕后，每管加入相应的不同荧光染料标记的膜标记抗体CD3抗体，CD4抗体，CD8抗体、，冰上孵育15-30min。

11、直接加入 500μL 4%多聚甲醛固定细胞，冰上孵育40-60min。

12、 400-500g 离心5min，弃去上清液，然后加100μL 破膜剂重悬细胞，冰上孵育30min。

13、孵育完毕后，每管加入相应的荧光染料标记的IFN-γ抗体，冰上孵育30 min。

14、 400-500g离心5min，弃去上清后用200μL FACS buffer 重悬细胞或者使用500μL 4%多聚甲醛固定细胞，冰上孵育40-60min后再检测。

15、使用流式细胞术检测所标记抗体为阳性的细胞比例。（注：上机检测时需先过400目滤布之后再检测）

16、使用流式细胞术分析软件分析活细胞中的CD3+IFN-γ+ 、CD3+CD4+IFN-γ+和CD3+CD8+IFN-γ+的T细胞占相应细胞的比例，即为『肿瘤』抗原特异性T细胞的比例和含量（细胞越多检测越准确。建议检测时活细胞收取数大于10万，最好收集的活细胞数大于20万）。

储存/保存方法

-20 ℃ ~ -80℃冷冻干燥保存，有效期1年。

注意事项

1、本产品仅为体外检测用产品，不可食用，也不可注射使用等；请放置在远离儿童可及的范围。

2、现配现用，一旦使用培养基或PBS重悬纳米颗粒后立即加入待检测细胞中混合。

3、使用过程中可根据需要自由搭配所使用的不同抗体的荧光探针。

4、请将固定后的细胞放置在4 ℃并于一周内完成检测。

5、本产品只适用于小鼠样本的检测。

温馨提示：本产品仅作科研实验使用，不支持临床等研究